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申请/专利权人：湖南加农正和生物技术有限公司

摘要：本发明公开了一种裂殖壶菌肽螯合硒、制备方法及其在仔猪体内抑制猪繁殖与呼吸综合征的应用，该方法通过裂殖壶菌的提取、酶解、硒的添加和螯合剂的加入，有效制备出具有高生物活性的裂殖壶菌肽螯合硒。与现有技术相比，该裂殖壶菌肽螯合硒结合了硒的抗氧化和免疫增强特性，为仔猪提供了一种新型的营养补充剂，在仔猪体内，裂殖壶菌肽螯合硒能够有效增强免疫力，提高对猪繁殖和呼吸障碍综合症的抵抗能力，从而减少病毒感染的风险。

主权项：1.一种裂殖壶菌肽螯合硒的制备方法，其特征在于，制备方法如下：步骤1、将裂殖壶菌菌体使用0.1~0.3molL氢氧化钠水溶液按料液比1:80~120wv在85~95℃下提取20~40分钟，2~6℃下以8000~12000rpm离心15~25分钟，取上清，将提取的蛋白质用4~6molL盐酸调节pH至3~4，进行酸沉，取沉淀弃上清，冷冻干燥，得到裂殖壶菌粕蛋白；步骤2、对步骤1制备的裂殖壶菌粕蛋白加水，得到底物；再使用碱性蛋白酶对底物进行酶解，酶解温度为45~55℃，时间为6~10小时，pH为8~10；再采用复合风味蛋白酶酶解，酶解温度为35~45℃，pH为5~6.5，时间为3~5小时；酶解完成后，在沸水浴中灭酶5~15分钟，冷却后以8000~12000rpm离心5~15分钟，收集上清液；步骤3、在上清液中加入亚硒酸钠，采用0.5~2molL盐酸调节pH至5~6，加入螯合剂，调整温度为40~50℃，作用时间为0.5~2小时，得到混合物；步骤4、色谱分离：使用凝胶过滤色谱对步骤3的混合物进行初步分离，流速为0.4~0.5mLmin，收集具有最高金属螯合活性的峰，随后使用反相高效液相色谱进行进一步纯化，50~70wt%乙腈水溶液作为洗脱液梯度洗脱，流速为2~4mLmin，得到裂殖壶菌肽螯合硒；所述加入亚硒酸钠中硒的最终浓度为10~20ppm；所述螯合剂与硒的摩尔比为0.5~1：1；所述螯合剂的制备方法如下，以重量份计：S1、将3-氯-2-羟基丙硫酸钠盐加入水中，搅拌直至完全溶解，制成150~250份质量浓度为30~40%的水溶液；将15~20份间苯三酚加入到上述水溶液中，使用预先配制好的0.5~2molL氢氧化钠水溶液调节体系pH值至8~10，将溶液转移到变频微波反应器中处理，得到反应液；S2、在步骤S1制备的反应液冷却至室温后，加入8~12份三氯甲基环氧乙烷和4~8份二乙烯三胺和4~8份三2-氨基乙基胺；加热并维持在70~80℃，搅拌处理2~4小时，处理结束后，自然冷却至20~40℃，然后加入10~20份磷酸二氢钠，搅拌混合至均匀；S3、在保持25~35℃的条件下，滴加15~25份30wt%乙醛水溶液，滴加完成后，升温至80~95℃处理2~4小时，然后使用8000~12000rpm离心5~15分钟，收集离心后的上清液，进行过滤，得到螯合剂。

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