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申请/专利权人：希-莱科塔有限公司;新马特霍恩公司

摘要：本发明涉及一种生产海藻糖的方法，包括以任何顺序混合和反应以下物质的步骤，i至少一种α‑磷酸化酶，其能够催化糖原料和至少一种磷源，产生α‑D‑葡萄糖‑1‑磷酸中间体；ii至少一种海藻糖磷酸化酶，其能够催化α‑D‑葡萄糖‑1‑磷酸中间体和葡萄糖底物，产生海藻糖，其中所述海藻糖磷酸化酶是海藻糖磷酸化酶变体，其具有相比野生型海藻糖磷酸化酶的氨基酸序列在至少一个氨基酸位置上不同的氨基酸序列，iii至少一种糖原料，其通过α‑磷酸化酶的催化作用产生α‑D‑葡萄糖‑1‑磷酸中间体和副产物；和iv至少一种选自由磷酸及其无机盐组成的组的磷源。

主权项：1.一种生产海藻糖的方法，包括以任何顺序混合和反应以下物质的步骤，a至少一种α-磷酸化酶，其能够催化糖原料和至少一种磷源，产生α-D-葡萄糖-1-磷酸中间体，所述糖原料选自由蔗糖和淀粉组成的组，和所述磷源选自由磷酸及其无机盐组成的组；b至少一种海藻糖磷酸化酶，其能够催化α-D-葡萄糖-1-磷酸中间体和葡萄糖底物，产生海藻糖，其中所述海藻糖磷酸化酶是海藻糖磷酸化酶变体，其具有相比野生型海藻糖磷酸化酶的氨基酸序列，在至少一个氨基酸位置上不同的氨基酸序列；c至少一种选自由蔗糖和淀粉组成的组的糖原料，其通过所述α-磷酸化酶的催化作用产生α-D-葡萄糖-1-磷酸中间体和副产物，所述副产物选自由果糖副产物和淀粉副产物组成的组；和d至少一种选自由磷酸及其无机盐组成的组的磷源，和e葡萄糖底物和或至少一种葡萄糖异构酶，其中所述至少一种海藻糖磷酸化酶包含氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在相较SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的一个或更多氨基酸位置包含氨基酸取代，其中位于一个或更多氨基酸位置的氨基酸取代为或选自由SEQIDNO:1的氨基酸取代P383A、P383G、P383M、P383V、P383N、P383C、P383Q、P383S、P383T、N225V、N225L、N225I、N225M、A304I、A304L、T323I、T323V、Q487A、Q487G、Q487L、Q487M、V550P、S556T、T564E、D590N、D590G和K705N组成的组，或其中所述至少一种海藻糖磷酸化酶包含氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在相较SEQIDNO:160所示的氨基酸序列的一个氨基酸位置包含一个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代选自由L108I、V112I、N221V、A300I、T319I、P379V、S550T、Q558E、A643E和L707M组成的组；或其中所述至少一种海藻糖磷酸化酶包含氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在相较SEQIDNO:160所示的氨基酸序列的两个氨基酸位置包含两个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代选自由L108I和N221V、L108I和A300I、L108I和T319I、L108I和V483A、L108I和S550T、P379V和L108I、P379V和V112I、P379V和N221V、P379V和A300I、P379V和T319I、P379V和F345Y、P379V和V483A、P379V和V544I、及P379V和S550T组成的组；或其中所述至少一种海藻糖磷酸化酶包含氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在相较SEQIDNO:160所示的氨基酸序列的三个氨基酸位置包含三个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代选自由P379V和V483A和Q558E、P379V和V544I和S550T、P379V和V544I和Q558E、及P379V和S550T和Q558E组成的组；或其中所述至少一种海藻糖磷酸化酶包含氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在相较SEQIDNO:160所示的氨基酸序列的四个氨基酸位置包含四个氨基酸取代，其中所述氨基酸取代为P379V和V483A和V544I和Q558E。

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