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一种突变型质粒载体及制备方法和应用 

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申请/专利权人:青岛农业大学

摘要:本发明涉及一种突变型质粒载体及制备方法和应用,具体涉及用于防治番茄褐色皱纹果病毒的突变型质粒载体;所述突变型质粒载体包括如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列,命名为pCBFR2‑2bPT‑ToBRFV73‑294。本发明获得含有黄瓜花叶病毒(CMV)RNA2的突变型质粒载体pCBFR2‑2bPT‑ToBRFV73‑294,与含有CMVFny分离物的野生型RNA1和野生型RNA3的质粒混合接种,可以预防ToBRFV强毒的侵染,可作为抗番茄褐色皱纹果病毒的弱毒疫苗,对ToBRFV具有预防效果。

主权项:1.一种用于防治番茄褐色皱纹果病毒的突变型质粒载体,其特征在于,所述突变型质粒载体含有如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列;所述突变型质粒载体中突变型RNA2的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示;所述突变型质粒载体的制备方法,步骤如下:(1)中间载体pCBFR2-2bPT的构建:所述突变型质粒载体的中间载体为pCBFR2-2bPT,中间载体pCBFR2-2bPT含有CMVFny分离物的RNA2全长序列,并且在2682位g与2683位g之间插入TAATAG,以及SmaI酶切位点;(2)将中间载体pCBFR2-2bPT经SmaI单酶切,获得线性中间载体pCBFR2-2bPT,将线性中间载体pCBFR2-2bPT与核苷酸序列为SEQIDNO.1的ToBRFV基因片段同源重组,获得突变型质粒载体,命名为pCBFR2-2bPT-ToBRFV73-294;所述步骤(1)中间载体pCBFR2-2bPT的制备中以pCB301-CMVFny-R2为模板,使用到的引物为:序列如SEQIDNO.3所示的Fny2-2683-F和序列如SEQIDNO.4所示的Fny2-2682-R;步骤(2)中同源重组使用到的引物为序列如SEQIDNO.5所示的ToBRFV-73-F和序列如SEQIDNO.6所示的ToBRFV-294-R。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 青岛农业大学 一种突变型质粒载体及制备方法和应用

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