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多核酸载体的组合物和其用途 

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申请/专利权人:阿西莫夫公司

摘要:本文公开了目的载体和进入载体的组合物。本文还公开了目的载体和进入载体在甲基化妨碍的组装反应中的用途,其中组装的序列可用作后续组装反应中的进入载体。

主权项:1.一种包括骨架组分和插入位点组分的多核酸目的载体,其中:a所述骨架组分包括选择标记的核酸序列、复制起点以及包括共同识别位点和对应的切割位点的至少一个IIS型限制酶切位点,其中所述共同识别位点与甲基化位点重叠;和b所述插入位点组分包括5’IIS型双限制酶切位点和3’IIS型双限制酶切位点;其中每个IIS型双限制酶切位点包括:i第一共同识别位点和对应的切割位点,其中所述第一共同识别位点与形成所述插入位点组分和所述骨架组分之间的边界的甲基化位点重叠,和ii第二共同识别位点和对应的切割位点,其中所述第二识别位点缺少重叠的甲基化位点,其中与所述第一共同识别位点对应的所述切割位点和与所述第二共同识别位点对应的所述切割位点二者都位于所述第一共同识别位点和所述第二共同识别位点之间,其中:在与甲基化位点重叠的共同识别位点处的所述目的载体的甲基化阻碍与所述共同识别位点对应的所述切割位点的切割;当甲基化时,将所述目的载体暴露于识别所述目的载体的所述共同识别位点的IIS型限制性内切核酸酶,生成两个多核酸片段,其中包括所述骨架组分的片段的5’端核酸突出端或3’端核酸突出端的核苷酸序列不同;并且a中的所述IIS型切割位点与b中的所述IIS型切割位点的核苷酸序列不同。

全文数据:

权利要求:

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