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一种依靠酶级联反应的表面蛋白印迹聚合物的制备方法及应用 

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申请/专利权人:沧州市天津工业大学研究院

摘要:本发明涉及一种依靠酶级联反应的表面蛋白印迹聚合物的制备方法及应用;以酶级联反应介导局部自由基聚合实现在高单体浓度条件下制备表面印迹聚合物。利用由固定在纳米载体表面的GOxHRP、乙酰丙酮和葡萄糖组成的引发体系启动局部自由基聚合反应,使聚合反应围绕纳米载体表面进行。避免了自由基在整个溶液中的随机游离,即使在高单体浓度下聚合也不会出现团聚现象。同时,该方法在高单体浓度条件下进行,有利于功能单体和模板蛋白的充分预组装,从而可以提高印迹效率。合成的纳米印迹微球对溶菌酶的印迹容量为145.3mgg‑1,印迹因子为14.2。

主权项:1.一种依靠酶级联反应的表面蛋白印迹聚合物的制备方法,其特征是,包括如下步骤:1将纳米粒子表面进行羧基化修饰:利用3-氨丙基三乙氧基硅烷在纳米粒子表面水解,洗涤后获得氨基化纳米粒子;2将氨基化纳米粒子分散在四氢呋喃溶液中,加入丁二酸酐,室温搅拌1-8h后洗涤获得表面羧基化的纳米粒子;3将洗涤后的羧基化纳米粒子分散在磷酸盐缓冲液中,按照1.5:1的摩尔比加入葡萄糖氧化酶GOx和辣根过氧化物酶HRP,随后在1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺催化作用下使GOx和HRP共价偶联在纳米粒子表面;4用去离子水洗涤步骤3中的产物,获得固定化酶的纳米离子分散液;5将模板蛋白、主单体、功能单体、交联剂加入pH5.0磷酸盐缓冲液,预组装10-60min,获得预组装液;6向步骤5预组装液中加入固定化酶的纳米粒子分散液、乙酰丙酮和葡萄糖,引发聚合反应;在室温条件下聚合4-8h后停止反应,获得聚合液;7将步骤6中的聚合液离心并洗涤3-6次,获得表面蛋白印迹聚合物。

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权利要求:

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