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申请/专利权人：云南伦扬科技有限公司

摘要：本发明公开了一种双模式MnO2Fe,B‑CDs类过氧化物酶检测亚硝酸盐的方法，本发明通过微波法合成铁、硼掺杂碳点（Fe,B‑CDs），将其作为还原剂制备MnO2Fe,B‑CDs纳米材料，MnO2Fe,B‑CDs具有类过氧化物酶活性，能够氧化3,3',5,5'‑四甲基联苯胺（TMB）及H2O2体系产生的蓝色的oxTMB，一方面亚硝酸盐与TMB及H2O2一起加入能够增强纳米酶的类过氧化物酶活性，使体系的蓝色加深，另一方面，当MnO2Fe,B‑CDs氧化TMB及H2O2体系产生的蓝色的oxTMB后，再加入亚硝酸盐，使得亚硝酸盐与oxTMB发生重氮反应，形成黄色重氮盐，由此建立了分别在654nm及440nm波长处的亚硝酸盐双色双模式检测新方法，将本方法应用于食品及发酵食品中亚硝酸盐的检测分析，具有准确、灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

主权项：1.一种双模式MnO2Fe,B-CDs类过氧化物酶检测亚硝酸盐的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将0.5-1.0gFeCl3·6H2O、0.1-0.2gMgB2、2.0-2.5g柠檬酸和100-150μL乙二胺加入30-50mL去离子水中，超声处理20-30min后，将该混合溶液转移至聚四氟乙烯高压反应釜中，置于微波消解仪加热至170-190℃下反应1-2h，反应完成后自然冷却至室温，用0.22μm滤膜除去大颗粒杂质，再经高速离心，取出上清液，即为Fe,B-CDs；（2）在搅拌条件下将2-3mL0.01molLKMnO4加入到15-20mL去离子水中，在130-140℃的油浴中加热至沸腾，在沸腾的水溶液中加入步骤（1）制得Fe,B-CDs200-300μL，加热搅拌15-20min后，停止加热并在连续搅拌下将所得混合物冷却至室温，真空干燥，即得MnO2Fe,B-CDs；（3）在pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲溶液中加入MnO2Fe,B-CDs纳米酶、3,3',5,5'-四甲基联苯胺、H2O2及不同梯度浓度亚硝酸盐溶液，混匀，孵育10-15min，于654nm波长处测定吸光度，建立吸光度与亚硝酸盐素浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；另，在pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲溶液中加入MnO2Fe,B-CDs纳米酶、3,3',5,5'-四甲基联苯胺及H2O2，混匀，孵育10-15min，然后加入不同梯度浓度亚硝酸盐溶液，反应5-10min，于440nm波长处测定吸光度，建立吸光度与亚硝酸盐素浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；（4）样品中测定，在待测样品液中加入pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲溶液、MnO2Fe,B-CDs纳米酶、3,3',5,5'-四甲基联苯胺、H2O2，混匀，孵育10-15min，于654nm波长处测定吸光度，吸光度代入步骤（3）回归方程中，获得样品中亚硝酸盐含量；同时，在pH4.0醋酸-醋酸钠缓冲溶液中加入MnO2Fe,B-CDs纳米酶、3,3',5,5'-四甲基联苯胺及H2O2，混匀，孵育10-15min，然后加入待测样品液，反应5-10min，于440nm波长处测定吸光度，吸光度代入步骤（3）回归方程中，获得样品中亚硝酸盐含量。

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