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申请/专利权人：徐州医科大学

摘要：本发明公开了一种微流控芯片在结肠癌中异质型CTCs捕获与检测中的应用，本发明制备的螺旋分选微流控芯片快速富集异质性CTCs，并在免疫捕获检测芯片上对上皮表达型和间质表达型CTCs细胞进行分批捕获，同时利用两种不同适配体修饰的mPtNPs探针对其进行快速地检测。与传统CTCs研究方法相比，本发明在保持较高捕获效率的同时，能够对异质性CTCs做出灵敏和特异性的响应，同时捕获后的CTCs仍具有高活性。借助芯片技术，进一步实现了CTCs捕获和检测、鉴别一体化的研究。本发明开拓CTCs在临床的应用提供了一种有力的工具。

主权项：1.一种微流控芯片在结肠癌中异质型CTCs捕获与检测中的应用，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、制备微流控芯片；所述微流控芯片包括级联设置的螺旋分离芯片和免疫捕获检测芯片；所述螺旋分离芯片包括单螺旋微流控通道，所述单螺旋微流控通道的第一端位于单螺旋微流控通道的内部，所述单螺旋微流控通道的第二端位于单螺旋微流控通道的外部，所述单螺旋微流控通道的第一端设有两个入口，分别是鞘流入口和样品入口，且鞘流入口位于内侧，样品入口位于外侧；所述单螺旋微流控通道的第二端设有两个出口，分别是靶目标出口和废液出口，且靶目标出口位于内侧，废液出口位于外侧；所述免疫捕获检测芯片上设有依次连通的进口通道、第一凹槽、连接通道、第二凹槽、出口通道；所述第一凹槽为上皮型CTCs捕获检测区，第二凹槽为间质型CTCs捕获检测区；第一凹槽内设有NH2-EpCAM适配体修饰的Gel-GO水凝胶，第二凹槽内设有NH2-Vimentin适配体修饰的Gel-GO水凝胶；所述螺旋分离芯片的靶目标出口与免疫捕获检测芯片的进口通道连通；步骤二、异质性CTCs的分离；待检测血液样本先进入螺旋分离芯片后，分离得到异质性CTCs；所述异质性CTCs包括上皮型CTCs和间质型CTCs；步骤三、异质性CTCs的捕获；螺旋分离芯片的靶目标出口流出的异质性CTCs，通过免疫捕获检测芯片的进口通道进入免疫捕获检测芯片，待检测血液样本中的上皮型CTCs被第一凹槽捕获，间质型CTCs被第二凹槽捕获；步骤四、异质性CTCs的检测；1在第一凹槽内滴加SH2-EpCAM适配体修饰的mPtNPs溶液，即mPtNPsAptEpCAM溶液，孵育后再加入TMB和H2O2的混合溶液；2在第二凹槽内滴加SH-Vimentin适配体修饰的mPtNPs的溶液，即mPtNPsAptvimentin溶液，孵育后再加入TMB和H2O2的混合溶液；3利用mPtNPs催化TMB的显色反应，检测上皮型CTCs捕获检测区与间质型CTCs捕获检测区反应后的吸光度值与细胞数量之间的关系，计算上皮型CTCs和间质型CTCs的数量。

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