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申请/专利权人：马里兰大学巴尔的摩县
摘要：本发明涉及一种在以双链为主的DNA分子中产生具有使用者定义的长度和序列的单链突出端粘端的方法，其中所述方法与限制性核酸内切酶和DNA核酸外切酶活性无关，并且其中所形成的异源双链体DNA是使用DNA连接酶通过一次或多次连接来接合的，最终结果为产生具有单链突出端的双链DNA片段，以用于接合和产生具有可变区选择的更大的线性或共价闭合环状DNA分子。
主权项：1.一种形成具有5'或3'突出端的粘端块SEB的方法，所述方法包括：提供至少三个前体单链、双链DNA片段或其混合物，经设计使其正确地组装，以产生所定义的DNA序列；将所述至少三个前体DNA片段引入缓冲介质中；在熔融温度下施加热，致使所述至少三个前体DNA片段熔融；以及在存在热稳定性连接酶的情况下降低所述熔融温度以进行退火，从而产生了通过并置在DNA末端上的互补区域的碱基配对而形成的异源双链体双链DNA以供进一步连接，从而产生单链末端具有5'或3'突出端的新的更大的双链DNA产物以形成粘端块SEB，或其中所述5'或3'突出端是互补的，形成了共价闭合环状DNA。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 马里兰大学巴尔的摩县 用于产生具有单链粘端的双链DNA片段的异源双链体热稳定性连接组装(HTLA)和/或环状异源双链体热稳定性连接组装(CHTLA)
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