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申请/专利权人：中国检验检疫科学研究院综合检测中心

摘要：本发明属于试剂检测领域，尤其涉及基于液相色谱串联质谱的动物源性食品兴奋剂测定方法，包括样品的处理和保存；样液的制备；样液的净化：色谱测定：色谱图分析；其中色谱图分析包括输出色谱总图，识别色谱总图中的独立波峰以及交叉波峰，将交叉波峰分离成若干个独立波峰，确定所有的独立波峰对应的兴奋剂种类以及数量；在本申请中，能够在输出的色谱总图中准确的识别发生交叉的波峰，并能够将交叉波峰分离成若干个组成该交叉波峰的独立波峰，再对独立波峰进行物质分析，从而可以确定每一个独立波峰包含的兴奋剂种类和数量。

主权项：1.基于液相色谱串联质谱的动物源性食品兴奋剂测定方法，其特征在于，所述方法包括：S1、样品的处理和保存：将样品置入捣碎机捣碎；在捣碎样品的过程中，通过捣碎视觉系统监测样品的颗粒大小、样品的颜色分布以及流动速度，以确定样品是否达到预设的捣碎标准；当达到捣碎标准时，取出被捣碎的样品，并保存；S2、样液的制备：取捣碎的样品至离心管，加入混合内标溶液以及酶解液，混匀；酶解过夜后，冷却至室温，加入碱溶液和乙腈，混匀，加入盐溶液以进行萃取，随后进行离心，得到的萃取液即样液，并将样液取出；步骤S2中，取至离心管的样品质量为5g，加入40uL混合内标溶液，涡旋混匀1min，加入乙酸铵缓冲液10mL，加入β-葡萄糖醛酸酶芳基硫酸酯酶50uL，涡旋1min混匀后，在37℃下酶解过夜；冷却至室温，加入氢氧化钠溶液调整pH至10，加入10mL乙腈涡旋1min，加入4g无水硫酸钠和1g氯化钠，涡旋1min以进行萃取，静置10min，进行8000rmin的离心10min，得到样液；S3、样液的净化：用离心管取样液，对样液进行涡旋离心，用另一离心管取上清液，加入反萃盐包，涡旋离心，将乙腈层取出至净化管，烘干，加入复合溶液定容，并过滤，得到测定液；在步骤S3中，取样液6mL入离心管，并加入3mL水，涡旋1min后以5000rmin离心10min，将全部上清液转移至新的离心管中，加入2g无水硫酸镁，涡旋离心，取3mL乙腈层，用40℃氮对乙腈层热烘，析出固体，再加入乙腈和水定容，使定容后的溶液过0.22μm的尼龙滤膜，得到的过滤液即测定液；S4、色谱测定：取预制的兴奋剂标准溶液，先对兴奋剂标准溶液进行等体积进样色谱测定，再对测定液进行等体积进样色谱测定；色谱条件包括：温度：40℃；进样量：4μL；流动相A：甲醇；流动相B：0.1%甲酸水；流速：0.4mLmin；质谱条件包括：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：多反应监测；离子源温度：150℃；去溶剂温度：500℃；去溶剂气流速：1000Lh；毛细管电压：3.5kV；S5、色谱图分析：输出色谱总图，识别色谱总图中的独立波峰以及交叉波峰，将交叉波峰分离成若干个独立波峰，确定所有的独立波峰对应的兴奋剂种类以及数量；对每一交叉波峰，对该交叉波峰进行波峰分离包括：识别交叉波峰的左侧波峰的左端点以及交叉波峰的右侧波峰的右端点；确定交叉波峰的左侧波峰的右端点以及交叉波峰的右侧波峰的左端点；将右侧波峰左端点的横坐标对应在左侧波峰上的点与左侧波峰的右端点连接，得到第一线段；将左侧波峰右端点的横坐标对应在右侧波峰上的点与右侧波峰的左端点连接，得到第二线段；依据第一线段以及第二线段在交叉波峰的交叉区域确定左侧波峰的边界线以及右侧波峰的边界线；将左侧波峰的未交叉线段与相应的边界线连接，进而使左侧波峰成为独立波峰；将右侧波峰的未交叉线段与相应的边界线连接，进而使右侧波峰成为独立波峰；确定所有的独立波峰对应的兴奋剂种类以及数量包括：确定每一独立波峰对应的质荷比在输出结果表内是否是唯一的质荷比；对于质荷比在输出结果表内是唯一的质荷比的每一独立波峰，将该唯一的质荷比对应的兴奋剂种类作为该独立波峰的兴奋剂种类，并将该独立波峰的顶点纵坐标作为该独立波峰对应的兴奋剂数量；对于质荷比在输出结果表内不是唯一的质荷比的独立波峰，计算每一独立波峰的物质比例，并依据该物质比例中的物质种类确定该独立波峰对应的兴奋剂种类，并用该独立波峰的顶点纵坐标乘以物质比例中各物质的占比，得到该独立波峰对应的每一种兴奋剂的数量，其中，物质比例包括该独立波峰对应的每一种兴奋剂种类以及相应的占比。

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