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申请/专利权人：赛纳生物科技(北京)有限公司
摘要：本发明涉及一种固相介质表面双端扩增测序的方法，只需要进行一次扩增反应，即可实现双端测序，减少了双端测序所需的步骤，节省了时间；本发明公开的双端扩增测序方法适用于包括荧光发生测序在内的多种测序技术，兼容性更强。
主权项：1.一种固相介质表面双端扩增测序的方法，其特征在于，包括：（1）提供固定在固相介质表面的三种扩增寡核苷酸，所述扩增寡核苷酸包括无剪切位点的第一扩增寡核苷酸，有剪切位点的第一扩增寡核苷酸和全部有剪切位点的第二扩增寡核苷酸，且前述两种剪切位点不相同；所述两种第一扩增寡核苷酸除了剪切位点外，其他序列均相同；（2）提供单链模板多核苷酸，通过与所述第一扩增寡核苷酸的杂交，单链模板多核苷酸加载至固相介质表面；所述的单链模板多核苷酸两端含有公共接头序列，即接头序列1和接头序列2，其中，接头序列1和第一扩增寡核苷酸至少部分序列是互补配对的；接头序列2和第二扩增寡核苷酸至少部分序列是相同的；（3）初始延伸：延伸所述第一扩增寡核苷酸，生成与所述单链模板多核苷酸互补的延伸产物；解旋，得到介质表面带有与模板多核苷酸互补配对的多核苷酸单链；（4）扩增：提供扩增反应物，在介质表面进行扩增，生成多个固定在介质表面的双链多核苷酸，所述双链多核苷酸包括第一链和第二链；（5）剪切：通过作用于有剪切位点的第一扩增寡核苷酸，在剪切位点位置打断所述第一扩增寡核苷酸，选择性去除所述双链多核苷酸中的第二链，并生成可延伸的3’末端；（6）封端：加入封端试剂，对介质表面的多核苷酸链或寡核苷酸的3’端进行封堵；（7）第一链测序：杂交第一测序引物，测序；（8）剪切：通过作用于第二扩增寡核苷酸，在剪切位点位置打断所述第二扩增寡核苷酸，选择性去除所述双链多核苷酸中的第一链，并生成可延伸的3’末端；（9）封端：加入封端试剂，对介质表面的多核苷酸链或寡核苷酸的3’端进行封堵；（10）第二链测序：杂交第二测序引物，测序；所述固相介质表面修饰有化学基团。
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权利要求：
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