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摘要：本申请涉及基因工程技术领域，具体公开一种CRISPR‑Cas9介导的外显子定点突变方法、供体DNA及其应用。其中CRISPR‑Cas9介导的外显子定点突变方法为：在目标外显子上插入人工内含子，并运用细胞同源重组修复机制，在同源臂上引入突变碱基，以对目标外显子进行定点突变；所述人工内含子包括内含子识别单元以及插入在内含子识别单元中的报告基因表达单元；所述内含子识别单元用于细胞对人工内含子进行识别以在转录时对人工内含子进行切割；所述报告基因表达单元包括报告基因和使报告基因表达的启动子。本申请可以将人工内含子插入至基因序列的任意位置，进而缩短酶切位点与编辑位点的碱基距离，以获得更小的CT值，使外显子定点突变效率得以提高。
主权项：1.一种CRISPR-Cas9介导的外显子定点突变方法，其特征在于，所述外显子定点突变方法为在目标外显子上插入人工内含子，并运用细胞同源重组修复机制，在同源臂上引入突变碱基，以对目标外显子进行定点突变；其中，所述人工内含子包括内含子识别单元以及插入在内含子识别单元中的报告基因表达单元；所述内含子识别单元用于细胞对人工内含子进行识别以在转录时对人工内含子进行切割；所述报告基因表达单元包括报告基因和使报告基因表达的启动子。
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百度查询： 深圳先进技术研究院 CRISPR-Cas9介导的外显子定点突变方法、供体DNA及其应用
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