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摘要:本发明公开了一种研究尿酸诱导半月板病变机制的试验方法,涉及半月板病变机制技术领域;包括如下步骤:S1:收集1051名半月板损伤患者和2027名健康体检者的空腹静脉血检测信息,比较半月板损伤的患者与健康体检者血清肾脏功能指标;通过多次检测证明了尿酸会通过多种复杂的分子机制从多个生物学功能层面影响MeSCs的细胞干性,减少这些对半月板功能维稳和损伤修复起重要作用的干细胞数量,促进半月板组织的退行性病变,最终致使半月板更容易发生组织损伤,尿酸与半月板之间存在密切关联,血清高尿酸含量可能是导致半月板退行性改变的潜在诱因之一,为半月板损伤的早期预防及其临床治疗提供宝贵的线索与重要信息。
主权项:1.一种研究尿酸诱导半月板病变机制的试验方法,其特征在于,包括如下步骤:S1:收集1051名半月板损伤患者和2027名健康体检者的空腹静脉血检测信息,比较半月板损伤的患者与健康体检者血清肾脏功能指标;S2.1:从骨科膝部外科手术的患者半月板组织中分离提取MeSCs,然后使用流式细胞术的方法检测UA对MeSCs周期变化和凋亡情况的影响,检测其分化情况并验证UA对MeSCs分化潜能的影响,并生产用于染色的分化细胞;并使用多种染色剂对分化细胞进行染色检测尿酸对MeSCs成脂、成软骨和成骨分化能力的影响;S2.2:MeSCs接种于孔板中加入不同浓度的UA,随后通过加入CCK-8试剂检测UA对MeSCs的增殖能力的影响;S2.3:使用qRT-PCR法检测炎性因子和基质金属蛋白酶和聚蛋白多糖酶ADAMTSs基因的表达;通过qRT-PCR实验验证分化标志物基因表达情况,通过实时定量聚合酶链式反应检测UA对MeSCs促炎因子和金属基质蛋白酶目的基因的影响;S3:对不同浓度UA处理后的MeSCs进行SA-β-Gal染色、观察细胞颜色变化,验证UA对MeSCs衰老的影响;通过Westernblot实验检测其衰老标记蛋白p16、p21表达的变化;S4:建立SD大鼠高尿酸动物模型,对模型大鼠给予尿酸灌胃处理,随后提取半月板组织,用HE染色和番红固绿染色观察半月板内部结构和胶原表达情况的变化;S5:对不同浓度尿酸处理后的人源MeSCs进行转录组测序,验证尿酸通过何种分子机制影响MeSCs,并通过Westernblot实验对关键信号通路进行蛋白表达的验证。
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百度查询: 重庆医科大学 一种研究尿酸诱导半月板病变机制的试验方法
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