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摘要:本发明公开一种斑马鱼心衰模型的构建及检测方法,cmlc2:GFP转基因斑马鱼将绿色荧光蛋白报告基因偶联在cmlc2启动子下游,使其在荧光显微镜下可观察到带绿色荧光的斑马鱼心脏;nppb:luc转基因斑马鱼将luciferase报告基因偶联在nppb启动子下游,通过luciferase数值来标识nppb的表达水平,用AA处理nppb:luc或cmlc2:GFP两种转基因的斑马鱼胚胎,致其心衰标志基因nppb表达量升高,干扰斑马鱼的心脏发育并降低其存活率,从而构建斑马鱼心衰模型。本发明构建的模型在斑马鱼受精后72小时诱导斑马鱼心衰,同时在斑马鱼动物水平以及组织水平上进行心脏发育和心衰标志基因的表达分析,能快速完成心衰模型的构建及分析;稳定性高、重复性好,可应用于高通量药物筛选及分析。
主权项:1.一种斑马鱼心衰模型的构建方法,其特征在于,cmlc2:GFP转基因斑马鱼将绿色荧光蛋白报告基因偶联在cmlc2启动子下游,使其在荧光显微镜下可观察到带绿色荧光的斑马鱼心脏;nppb:luc转基因斑马鱼将luciferase报告基因偶联在nppb启动子下游,通过luciferase数值来标识nppb的表达水平,用AA处理nppb:luc或cmlc2:GFP两种转基因的斑马鱼胚胎,致其心衰标志基因nppb表达量升高,干扰斑马鱼的心脏发育并降低其存活率,从而构建斑马鱼心衰模型,模型的构建步骤如下:S1、斑马鱼发育阶段的确定;S2、药物处理:将微孔板设为两个实验组分别为药物处理组和对照组;S3、采用斑马鱼心肌病模型进行心衰分析;S4、分析斑马鱼心脏发育;S5、分析斑马鱼的存活率;所述步骤S1中分别取nppb:luc或cmlc2:GFP品系转基因斑马鱼的亲本交配、孵化,选择发育24hpf的斑马鱼分别移入到对应的微孔板中,并标记区分;所述步骤S3的心衰分析是药物处理nppb:luc品系斑马鱼至72hpf后,向微孔板的每个孔内加入荧光素酶试剂,避光孵育,对荧光素酶的值进行测定,观察心衰标志基因nppb的表达水平;所述步骤S4分析心脏发育是对药物处理cmlc2:GFP品系斑马鱼至72hpf后,将斑马鱼麻醉后,置于荧光显微镜下观察斑马鱼的心脏形态。
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百度查询: 东南大学 一种斑马鱼心衰模型的构建及检测方法
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