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摘要：一种检测两种硝基呋喃代谢物的聚集诱导发光免疫层析试剂盒及应用，所述试剂盒包括免疫层析试纸条和聚集诱导发光荧光探针，所述免疫层析试纸条包括聚氯乙烯底板，在聚氯乙烯底板上表面设置有硝酸纤维素膜、吸水垫和样品垫，在硝酸纤维素膜上表面靠近样品垫一侧依次设有检测线T1、检测线T2和质控线C；所述聚集诱导发光荧光探针包括BTPETD制备的绿色聚集诱导发光荧光微球探针和TPB制备的红色聚集诱导发光荧光微球探针。优点是：使用方便，操作简单。用于对呋喃它酮代谢物和呋喃妥因代谢物两种代谢物的同时定性和定量检测，大大提高检测效率，又可以有效提高检测灵敏度。

主权项：1.一种检测两种硝基呋喃代谢物的聚集诱导发光免疫层析试剂盒，所述试剂盒包括免疫层析试纸条和聚集诱导发光荧光探针，所述免疫层析试纸条包括聚氯乙烯底板，在聚氯乙烯底板上表面设置有硝酸纤维素膜，在聚氯乙烯底板上表面分别设置有搭接在硝酸纤维素膜左右两侧的吸水垫和样品垫，在硝酸纤维素膜上表面靠近样品垫一侧依次设有检测线T1、检测线T2和质控线C；其特征是：所述检测条T1、检测线T2和质控线C分别是使用划膜仪以1μLcm的速率将2-NP-AMOZ-BSA包被抗原、2-NP-AHD-BSA包被抗原和山羊抗鼠IgG分别喷涂在硝酸纤维素膜上获得的；所述聚集诱导发光荧光探针包括绿色聚集诱导发光荧光微球探针和红色聚集诱导发光荧光微球探针，其具体步骤如下：1绿色聚集诱导发光荧光微球探针的制备①绿色聚集诱导发光荧光微球的制备将200μL的1mgmL4,7-双[4-1,2,2-三苯基乙烯基苯基]苯并-2,1,3-噻二唑BTPETD和50μL的2mgmL聚苯乙烯-马来酸酐PSMA混合，并用四氢呋喃定容至1mL，得到混合溶液A；在超声条件下，将混合溶液A注入10mL去离子水中，然后室温下超声作用2min～10min后，置于75℃水浴中，氮气吹扫至残余液体为5mL；将残余液体冷却至室温，使用0.22μm的硝酸纤维素膜过滤器过滤，收集滤液，得到绿色聚集诱导发光微球分散液；②绿色聚集诱导发光荧光微球探针的制备量取1mL制备的绿色聚集诱导发光溶液、10μL的1mgmL呋喃它酮衍生化代谢物2-NP-AMOZ抗体溶液和60μL的5mgmLEDC溶液混合均匀，室温条件下避光反应4h；反应完成后，利用100KDa超滤离心管以4000rpmmin离心5min，收集内套管残余液体，得到绿色聚集诱导发光荧光微球探针；2红色聚集诱导发光荧光微球探针的制备①红色聚集诱导发光荧光微球的制备将100μL的1mgmLN,N'-苯并[c][1,2,5]噻二唑-4,7-二乙基双4,1-苯双N-4-1,2,2-三苯基乙烯基苯基菲-1-胺TPB和50μL的2mgmLPSMA混合，并用四氢呋喃定容至1mL，得到混合溶液B；在超声条件下，将混合溶液B注入10mL去离子水中，然后室温下超声作用20min～30min后，置于75℃水浴，氮气吹扫至残余液体为5mL；将残余液体冷却至室温，使用0.22μm的硝酸纤维素膜过滤器过滤，收集滤液，得到红色聚集诱导发光微球分散液；②红色聚集诱导发光荧光微球探针的制备量取1mL制备的红色聚集诱导发光溶液、18μL的1mgmL呋喃妥因衍生化代谢物2-NP-AHD抗体溶液和30μL的5mgmLEDC溶液混合均匀，室温条件下避光反应4h；反应完成后，利用100KDa超滤离心管以4000rpmmin离心5min，收集内套管残余液体，得到红色聚集诱导发光荧光微球探针。

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