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摘要：本发明公开了一种粪菌移植通过肠道菌群干预类风湿关节炎模型的构建方法，属于模型构建技术领域。本发明采用UHPLC‑Q‑ExactiveOrbitrap‑MS技术，通过代谢组学分析类风湿关节炎大鼠的血清，并筛选差异代谢物，以揭示粪菌移植通过影响肠道菌群来干预RA进程的作用机制。本发明从大鼠血清中共筛选出13种差异代谢物包括花生四烯酸、二十二碳六烯酸、13S‑羟基十八碳二烯酸和L‑苯丙氨酸等，经通路富集筛选出3条代谢通路：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成，苯丙氨酸代谢和花生四烯酸代谢。并证明风湿宁粪菌移植可通过改善类风湿关节炎大鼠的肠道菌群失调来影响花生四烯酸代谢途径，通过调节代谢紊乱来干预类风湿关节炎的进程。

主权项：1.一种风湿宁粪菌移植通过肠道菌群干预类风湿关节炎模型的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1，将大鼠随机分为正常组、模型组、风湿宁粪菌移植组、雷公藤多苷片组和风湿宁组，然后将各组大鼠进行给药处理，并完成检测前准备；步骤2，采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术对各组大鼠血清进行代谢组学分析；步骤3，使用CompoundDiscoverer对峰面积进行归一化处理；步骤4，通过SIMCA-P进行PCA分析与OPLS-DA分析来观察大鼠代谢物的变化；步骤5，用GraphPadPrism对数据进行可视化处理，初步筛选出差异代谢物；步骤6，经HMDB数据库鉴定并确定差异代谢物；步骤7，通过MetaboAnalyst对差异代谢物进行通路富集分析，筛选通路Impact值＞0.1的关键代谢途径；所述差异代谢物包括胆酸、肉豆蔻酸乙酯、油酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸、D-色氨酸、D-半乳糖、姜辣素、2，4-二氯甲苯、N-十一烷基苯磺、12-羟基月桂酸和13S-羟基十八碳二烯酸；所述关键代谢途径包括三条代谢通路，分别是：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成代谢通路、苯丙氨酸代谢通路和花生四烯酸代谢通路；所述步骤1将大鼠随机分为正常组、模型组、粪菌移植-风湿宁组、雷公藤多苷片组和风湿宁组，然后将各组大鼠进行给药处理，并完成检测前准备的具体方法是：适应性喂养大鼠1周后，将30只大鼠随机分为5组，分别为正常组、模型组、粪菌移植-风湿宁组、雷公藤多苷片组和风湿宁组，每组6只；正常组和模型组生理盐水灌胃2mLd；对粪菌移植-风湿宁组建立肠道无菌模型后，每日用针管抽取2mL粪菌液，去掉针头，换为透明软管，将粪菌液缓慢注入到FMT-F组大鼠的肛门中，灌肠后用手指按压大鼠的肛门，并且将大鼠颠倒45°使其以头朝下的姿势，以此状态维持1min，防止灌肠溶液流出；雷公藤多苷片组将雷公藤多苷片用生理盐水制备为溶液后给予2mLd灌胃；风湿宁组大鼠灌胃风湿宁2mLd；每组大鼠均连续给药21d；最后给药的前1天，各组所有的大鼠都需禁食；最后一天给药1h后，从所有大鼠腹部动脉采血，离心10min，4℃，14000rpm，取上清液，分装于EP管中，-80℃储存备用；取100μL血清，加入300μL乙腈，涡旋1min，离心10min，4℃，14000rpm，取上清液200μL，氮气吹干，加入200μL乙腈复溶，涡旋、离心，取上清液进样分析；所述步骤2中超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术具体参数条件为：色谱条件：采用ACQUITYBEHC18色谱柱，100mm×2.1mm，1.7μm；柱温40℃，体积流量为0.3mLmin，进样量5μL；流动相A为乙腈，流动相B为0.01%甲酸水溶液，梯度洗脱条件如下：0~1.5min，流动相A占比95%，流动相B占比5%；1.5~4.5min，流动相A占比75%，流动相B占比25%；4.5~7min，流动相A占比70%，流动相B占比30%；7~11min，流动相A占比45%，流动相B占比55%；11~12min，流动相A占比15%，流动相B占比85%；12~13.5min，流动相A占比5%，流动相B占比95%；13.5~14min，流动相A占比95%，流动相B占比5%；质谱条件：离子传输管温度320℃；S-LensRFLevel为50；全扫描数据依赖二级扫描，扫描范围100～1000mz；一级质量分辨率70000FWHM，二级分辨率17500FWHM，碰撞能量30eV。

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