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摘要：本发明公开了一种探测能量状态发生变化的蛋白及配体与蛋白亲和力的方法，具体涉及蛋白质能量状态发生变化之后对酶切的耐受程度发生变化，采用较大量的酶在非变性条件下，使蛋白较为完全的酶切，直接产生分子量小于5KDa、直接可以用于自下而上质谱分析的小肽段。由于该部分肽段两个酶切位点距离较近且均能反映蛋白区域稳定性，在蛋白质能量状态发生变化时，每个位点均将产生差异，两个酶切位点酶切差异的累积效应大大提高了该部分肽段对加入配体的响应幅度，因此该方法具有极高的灵敏度。使用定量蛋白质组学找到酶切差异肽段，分析差异肽段所属蛋白及位于蛋白质的位置，能够在整个蛋白质组范围内确定能量状态发生变化的蛋白及变化区域。
主权项：1.一种探测能量状态发生变化的蛋白的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤：A、将待比较的两组或三组及以上处于不同能量状态的蛋白溶液与蛋白酶混合孵育0.5-60min，酶与蛋白样品的质量比例在1:1-1:50之间，使得蛋白质发生破坏性酶切，直接产生含有两个能反映蛋白质区域稳定性酶切位点并适合自下而上质谱分析的小肽段；所述蛋白溶液其中一组为基准对照组，其为能量状态未曾发生变化的蛋白溶液；其余为实验组，其为能量状态发生变化的蛋白溶液；所述自下而上是指由肽段到蛋白，所述小肽段的分子量5KDa；B、将步骤A产生的小肽段和蛋白质大片段分离；所述蛋白质大片段的分子量≥10KDa；C、使用质谱定量以及分析所得到的小肽段的丰度、小肽段所属蛋白及小肽段在蛋白上的位置；D、通过分析小肽段在实验组和对照组样品中丰度的差异，判断能量状态发生变化的蛋白质；E、通过分析丰度发生变化的小肽段在所属蛋白中的位置来确定能量状态发生变化的亚蛋白结构区域。
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百度查询： 中国科学院大连化学物理研究所 探测能量状态发生变化的蛋白或配体与蛋白亲和力的方法
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