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摘要:本发明提供了一种实现高通量蛋白亲和力改造的方法及其应用,所述方法包括:对编码蛋白序列的质粒的DNA进行随机突变,将突变前后的质粒混合,得到质粒混合物;将质粒混合物转染到细胞中,进行蛋白表达;将蛋白混合物和与其结合的配体孵育,通过富集配体将与配体结合的具有高亲和力的突变蛋白纯化出来;采用质谱分析方法对纯化前后的突变蛋白样品进行检测;采用测序软件对质谱数据进行解析,得到突变蛋白的氨基酸序列及突变蛋白的相对丰度,进而计算出其对应的亲和力。本发明极大的简化了实验流程,提高了蛋白筛选效率,突破了噬菌体展示等蛋白改造技术的限制,适用于所有种类蛋白亲和力的高通量改造。
主权项:1.一种实现高通量蛋白亲和力改造的方法,其特征在于,所述方法包括:1对编码蛋白序列的质粒的DNA进行随机突变,将突变前后的质粒混合,得到质粒混合物;将质粒混合物转染到细胞中,进行蛋白表达;2将蛋白混合物和与其结合的配体孵育,通过富集配体将与配体结合的具有高亲和力的突变蛋白纯化出来;3采用质谱分析方法对纯化前后的突变蛋白样品进行检测;4采用测序软件对质谱数据进行解析,得到突变蛋白的氨基酸序列及突变蛋白的相对丰度,进而计算出其对应的亲和力。
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百度查询: 上海快序生物科技有限公司 一种实现高通量蛋白亲和力改造的方法及其应用
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