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摘要:本发明属于组织培养技术的植物再生技术领域,尤其涉及一种沙地云杉遗传转化方法及其种子筛分系统。本方法包括:步骤S1,通过筛分设备分离原始材料中的沙地云杉种子和大颗粒杂质;步骤S2,沙地云杉诱导愈伤,浸泡法选种,再对沉底的种子消毒,切开消毒后的种子,取出沙地云杉成熟胚,以沙地云杉成熟胚作为外植体,将外植体接种在培养基中;步骤S3,沙地云杉遗传转化,冻融法质粒转农杆菌,培养农杆菌,暗培养2d后将愈伤组织转移到抗性培养基上培养并观察。本发明以沙地云杉愈伤组织为受体材料,筛选出适宜的报告基因GUS的遗传转化条件,并通过农杆菌介导法对愈伤组织PmLEA25基因进行遗传转化,建立愈伤组织遗传转化体系。
主权项:1.一种沙地云杉遗传转化方法,其特征在于,包括:步骤S1,通过筛分设备分离原始材料中的沙地云杉种子;步骤S2,沙地云杉的愈伤组织诱导,即浸泡法选种,滤掉漂浮在水面的种子,再对沉底的种子消毒,切开消毒后的种子,取出沙地云杉成熟胚,以沙地云杉成熟胚作为外植体,将外植体接种在MS、WPM、DCR、LM和SH五种基本培养基中,各培养基经过高压蒸汽灭菌后分装、培养及统计诱导率,以获得满足遗传转化的愈伤组织;步骤S3,沙地云杉遗传转化,即,将愈伤组织浸入农杆菌菌液中,使得外源基因导入愈伤组织中,通过筛选和鉴定获得转基因植株。
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百度查询: 内蒙古农业大学 沙地云杉遗传转化方法及其种子筛分系统
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