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申请/专利权人：北京中医药大学

摘要：本发明提供乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法，包含如下步骤：（1）将粒径为5‑20目余甘子药材在40‑60℃条件下进行温浸提取，所述温浸提取采用的溶剂为50‑80%乙醇，得到提取液；将提取液浓缩，然后加水分散，并进行固液分离，离心或过滤，得上清液；（2）将步骤（1）分离出的液体经大孔吸附树脂HPD‑400吸附，吸附流速为0.5‑2mlmin，用水洗脱，洗脱流速为0.2‑3mlmin，将洗脱液减压干燥。该方法简便，含量、转移率较高，放大工艺验证结果也表明所建立的制备工艺稳定可行，适合于工业化生产需要。

主权项：1.一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法，包含如下步骤：（1）将粒径为5‑20目余甘子药材在40‑60℃条件下进行温浸提取，所述温浸提取采用的溶剂为50‑80%乙醇，得到提取液；将提取液浓缩至无醇味，然后加水分散，并进行固液分离，得上清液；（2）将步骤（1）分离出的上清液经大孔吸附树脂HPD‑400吸附，吸附流速为0.5‑2mlmin，用水洗脱，洗脱流速为0.2‑3mlmin，得洗脱液，将洗脱液干燥。

全文数据：一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法技术领域本发明涉及一种中药活性成分的制备方法，具体地是一种乙醇温浸制备诃黎勒酸的方法。背景技术余甘子为双子叶植物药大戟科植物余甘子PhyllanthusemblicaL.的果实，具有化痰、生津、止咳、解毒的功效，主治感冒发热，咳嗽咽痛，白喉，烦热口干。分布福建、广东、广西、云南、贵州、四川、台湾等地。余甘子大多是野生或半野生，几乎不受工业污染，是名副其实的绿色食品加工原料。余甘子新鲜果实含鞣质45%，未成熟果实含鞣质30%～35%，干燥果实中总鞣质含量可达到14%，其中已分离得到诃子酸chebrlinicacid、诃黎勒酸chebulagicacid、鞣云实素corilagin、原诃子酸terchebin、诃子裂酸chebulicacid及没食子酸、鞣花酸。另含余甘子酸phyllemblicacid、余甘子酚emblicol、粘酸mucieacid，以及丰富的维生素C1.0～1.8g100g。目前，国内对诃黎勒酸的研究较少，尚处于起步阶段，CN104945447A，2015年9月30日公开，涉及诃黎勒酸的制备方法，方法中采用诃子叶为原料，经酶解、超声波提取、陶瓷膜分离、大孔树脂吸附等步骤，如酶解、超声波提取在生产上应用不广泛，不利于产业化推广，而且含量不高、成本高昂。发明内容为了克服现有技术的不足，本发明采用余甘子药材为原料，用乙醇温浸提取，扩大了制备诃黎勒酸的路径，降低了提取能耗，且采用果实药材为原料可避免采用叶子为原料带来的环境破坏，经济环保。本发明提供一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法，包含如下步骤：（1）将粒径为5-20目余甘子药材在40-60℃条件下进行温浸提取，所述温浸提取采用的溶剂为50-80%乙醇，得到提取液；将提取液浓缩至无醇味，然后加水分散，并进行固液分离，得上清液；（2）将步骤（1）分离出的上清液经大孔吸附树脂HPD-400吸附，吸附流速为0.5-2mlmin，用水洗脱，洗脱流速为0.2-3mlmin，得洗脱液，将洗脱液干燥。优选地，步骤（1）中，余甘子药材粒径为5-10目；和或，所述温浸提取采用的溶剂为60-70%乙醇，优选65-68%；和或，乙醇用量为药材的6-10倍（ww），优选8-9倍；和或，浓缩方式为减压浓缩；和或，所述固液分离方式为离心分离或过滤，优选离心，离心转速为2800-3200转min；离心时间为20-40min；和或，所述温浸提取时间6-12h，优选8-10h。优选地，步骤（2）中，大孔吸附树脂型号为：HPD-400、HPD-500、HPD-826、DianioHP-20p、AB-8，优选为：HPD-826、HPD-400、DianioHP-20p；和或，树脂径高比为1:4-1:8，优选1:6-1:8；和或，吸附流速为0.6-1.2mlmin；和或，洗脱流速为0.5-1.2mlmin；和或，所述干燥为减压干燥，温度为40~80℃；和或，洗脱体积为2-5BV，优选为3-4BV；和或，洗脱用水为纯化水。优选地，所述温浸提取次数2-4次；和或，提取时间6-12h，优选为8-10h。本发明提供一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法，包含如下步骤：（1）将粒径为5-20目余甘子药材在40-60℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为50-80%乙醇，溶剂用量为药材的6-10倍（ww），提取2-4次，每次提取时间6-12h，得到提取液；将提取液浓缩至无醇味，然后加水分散，并进行固液分离；（2）将步骤（1）分离出的液体经大孔吸附树脂HPD-400吸附，吸附流速为0.5-2mlmin，用纯化水洗脱2-5BV，洗脱流速为0.2-3mlmin，将洗脱液减压干燥。优选地，所述固液分离为离心或过滤。本发明的有益技术效果：1、本发明采用温浸提取方法，具有提取能耗低、热敏性成分充分保留的优点；且过程仅采用乙醇和水作为溶剂，有利于安全和环保。2、本发明的纯化采用大孔吸附树脂HPD-400，诃黎勒酸转移率在65%以上，HPLC归一化法检测含量98%以上。3、本发明该方法简便，诃黎勒酸含量、转移率较高，放大工艺验证结果也表明所建立的制备工艺稳定可行，适合于工业化生产需要。4、本发明采用余甘子药材为原料，用乙醇温浸提取，扩大了制备诃黎勒酸的路径，且采用果实药材为原料可避免采用叶子为原料带来的环境破坏，保护环境。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件进行选择。实验仪器及条件：Waters1525型高效液相色谱仪；2996型PAD检测器；Empower色谱工作站，25μL可调进样器；十万分之一电子分析天平：SartoriousBT25S型（北京赛多利斯仪器有限公司）；超声波清洗器（功率：100W，型号：KQ-500DE昆山超声仪器有限公司）；EYELA旋转蒸发仪（日本，型号：N-1000）；SHZ-D（Ⅲ）水循环真空泵（河南省予华仪器有限公司）。试药及原料来源：余甘子药材购自北京藏医院（产地尼泊尔），经北京中医药大学生药系阎玉凝教授鉴定为大戟科植物PhyllanthusemblicaL.的干燥果实。诃黎勒酸对照品自制，经UV、MS、1HNMR、13CNMR鉴定结构，HPLC检测，峰面积归一化法测定纯度大于98.5%，符合定量要求。甲醇（Fisher公司，色谱纯）；屈臣氏纯净水；其他试剂均为分析纯。色谱材料：大孔吸附树脂C（沧州宝恩吸附材料科技有限公司）；ToyopearlHW-40（Coarse）、ToyopearlHW-40（Fine）（日本Tosoh公司）；MCIgelCHP20P（日本三菱化学公司）；聚酰胺薄膜（薄层层析8cm*8cm）（浙江黄岩四青生化材料厂）；硅胶G板（青岛海洋化工厂分厂）。展开剂：（1）丙酮：甲醇：甲酸：水（3：6：8：16）；（2）氯仿:甲醇:水（15:4:1）；（3）乙酸乙酯-甲酸-水（24：5：1）；（4）氯仿:甲醇:甲酸：水（7:3:0.5:0.5）；（5）氯仿:甲醇:甲酸:水（6.5:3.5:0.5:0.5）；（6）乙酸乙酯:甲酸:水（24:5:1）。显色剂：2%FeCl3乙醇溶液，10%硫酸乙醇溶液。实施例1将粒径为5目余甘子药材100g在45℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为50%乙醇900ml，提取2次，每次提取10h，得到提取液；将提取液减压浓缩至无醇味，然后加50ml水分散至浓度相当于1g生药ml的药液，并在3000转min离心20min，得上清液。实施例2将粒径为10目余甘子药材100g在50℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为60%乙醇800ml，提取3次，每次提取6h，得到提取液；将提取液减压浓缩至无醇味，然后加35ml水分散至浓度相当于1.5g生药ml的药液，并在3200转min离心30min，得上清液。实施例3将粒径为20目余甘子药材100g在55℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为70%乙醇600ml，提取4次，每次提取8h，得到提取液；将提取液减压浓缩至无醇味，然后加100ml水分散至浓度相当于0.5g生药ml的药液，并在2800转min离心25min，得上清液。实施例4将粒径为8目余甘子药材100g在55℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为65%乙醇650ml，提取3次，每次提取9h，得到提取液；将提取液蒸发浓缩至无醇味，然后加20ml水分散至浓度相当于2g生药ml的药液，并在3000转min离心30min，得上清液。实施例5将粒径为10目余甘子药材100g在55℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为68%乙醇1000ml，提取3次，每次提取12h，得到提取液；将提取液蒸发浓缩至无醇味，然后加20ml水分散至浓度相当于0.75g生药ml的药液，过滤，得滤液。实施例6将实施例1所得上清液经大孔吸附树脂HPD-826吸附，径高比1:8，吸附流速为1.2mlmin，待吸附完成后，用纯化水洗脱3BV，洗脱流速为1.2mlmin，收集水洗脱液，减压干燥，得固体1.89g，测定其诃黎勒酸的含量98.54%，计算转移率68.97%。实施例7将实施例2所得上清液经大孔吸附树脂HPD-400吸附，径高比1:7，吸附流速为0.6mlmin，待吸附完成后，用纯化水洗脱4BV，洗脱流速为0.5mlmin，收集水洗脱液，减压干燥，得固体2.04g，测定其诃黎勒酸的含量98.44%，计算转移率74.38%。实施例8将实施例3所得上清液经大孔吸附树脂DianioHP-20p吸附，径高比1:6，吸附流速为2mlmin，待吸附完成后，用纯化水洗脱3BV，洗脱流速为1.5mlmin，收集水洗脱液，减压干燥，得固体2.18g，测定其诃黎勒酸的含量98.22%，计算转移率79.30%。实施例9将实施例4所得上清液经大孔吸附树脂HPD-500吸附，径高比1:5，吸附流速为0.5mlmin，待吸附完成后，用纯化水洗脱2BV，洗脱流速为2mlmin，收集水洗脱液，减压干燥，得固体1.99g，测定其诃黎勒酸的含量98.79%，计算转移率72.81%。实施例10将实施例5所得滤液经大孔吸附树脂AB-8吸附，径高比1:6，吸附流速为1.2mlmin，待吸附完成后，用纯化水洗脱4BV，洗脱流速为2mlmin，收集水洗脱液，减压干燥，得固体2.11g，测定其诃黎勒酸的含量98.79%，计算转移率77.29%。实施例11将实施例2所得滤液经大孔吸附树脂HPD-400吸附，径高比1:8，吸附流速为1.0mlmin，待吸附完成后，用纯化水洗脱3BV，洗脱流速为2mlmin，收集水洗脱液，减压干燥，得固体1.95g，测定其诃黎勒酸的含量98.79%，计算转移率75.09%。

权利要求：1.一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法，包含如下步骤：（1）将粒径为5-20目余甘子药材在40-60℃条件下进行温浸提取，所述温浸提取采用的溶剂为50-80%乙醇，得到提取液；将提取液浓缩至无醇味，然后加水分散，并进行固液分离，得上清液；（2）将步骤（1）分离出的上清液经大孔吸附树脂HPD-400吸附，吸附流速为0.5-2mlmin，用水洗脱，洗脱流速为0.2-3mlmin，得洗脱液，将洗脱液干燥。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，余甘子药材粒径为5-10目；和或，所述温浸提取采用的溶剂为60-70%乙醇，优选65-68%；和或，乙醇用量为药材的6-10倍（ww），优选8-9倍；和或，浓缩方式为减压浓缩；和或，所述固液分离方式为离心分离或过滤，优选离心，离心转速为2800-3200转min；离心时间为20-40min；和或，所述温浸提取时间6-12h，优选8-10h。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，大孔吸附树脂型号为：HPD-400、HPD-500、HPD-826、DianioHP-20p、AB-8，优选为：HPD-826、HPD-400、DianioHP-20p；和或，树脂径高比为1:4-1:8，优选1:6-1:8；和或，吸附流速为0.6-1.2mlmin；和或，洗脱流速为0.5-1.2mlmin；和或，所述干燥为减压干燥，温度为40~80℃；和或，洗脱体积为2-5BV，优选为3-4BV；和或，洗脱用水为纯化水。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述温浸提取次数2-4次；和或，提取时间6-12h，优选为8-10h。5.一种乙醇温浸法制备诃黎勒酸的方法，包含如下步骤：（1）将粒径为5-20目余甘子药材在40-60℃条件下进行温浸提取，采用的溶剂为50-80%乙醇，溶剂用量为为药材的6-10倍（ww），提取2-4次，每次提取时间6-12h，得到提取液；将提取液浓缩至无醇味，然后加水分散，并进行固液分离；（2）将步骤（1）分离出的液体经大孔吸附树脂HPD-400吸附，吸附流速为0.5-2mlmin，用纯化水洗脱2-5BV，洗脱流速为0.2-3mlmin，将洗脱液减压干燥。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述固液分离为离心或过滤。

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