买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：昆明理工大学

摘要：本发明公开了一种用于检测微量组织中PDGFRA基因突变的引物组合，其包括预扩增引物组、用于检测12号外显子突变的引物组、用于检测14号外显子突变的引物组、用于检测18号外显子突变的引物组；该方法旨在将微量的DNA通过预扩增得到较高浓度的DNA模板，结合直接测序法检测样本中PDGFRA基因的突变情况；将该引物组合应用于制备检测PDGFRA基因突变的检测试剂中，可检测样本的DNA浓度低至100pg，且可以同时检测PDGFRA基因第12、14和18号外显子的所有突变，本发明提供的检测方法灵敏度高，特异性强，成本低，适用于临床肿瘤患者PDGFRA基因突变的检测，具有很好的临床应用价值。

主权项：1.用于检测微量组织中PDGFRA基因突变的引物组合，其特征在于，由如SEQIDNO:1-SEQIDNO:18所示的预扩增引物组、如SEQIDNO:19-SEQIDNO:20所示的用于检测12号外显子突变的引物组、如SEQIDNO:21-SEQIDNO:22所示的用于检测14号外显子突变的引物组，如SEQIDNO:23-SEQIDNO:24所示的用于检测18号外显子突变的引物组组成；用于检测PDGFRA基因突变的引物组合的检测使用方法，具体步骤如下：（1）引物稀释将primer1-prime18分别稀释后混匀制得PrimerMix，其中primer1-primer16引物的终浓度为0.05-0.1μM，primer17-primer18引物的终浓度为1-3μM；primer19-primer24引物稀释至5-10μM；（2）预扩增在扩增管中加入1μL的10×反应缓冲液、2.5μL的PrimerMix、100-1000pg微量DNA模板、用去离子水补足至8.8μL；混匀，98℃预变性5-10min，然后置于冰上10-20min；再加入0.5μLdNTP10mMeach、0.2μL100×BSA以及0.5μLphi29DNA聚合酶，30-35℃扩增过夜，65℃加热10-20min使酶失活；（3）使用PCR纯化试剂盒纯化上述预扩增产物；（4）PDGFRA基因突变检测针对PDGFRA基因的12号、14号和18号外显子突变，分别采用如SEQIDNO:19-SEQIDNO:20所示的引物组检测12号外显子突变；如SEQIDNO:21-SEQIDNO:22所示的引物组检测14号外显子突变，如SEQIDNO:23-SEQIDNO:24所示的引物组检测18号外显子突变；配置PCR反应总体系为25μL：其中PfuMix混合液12.5μL、5-10μM正向引物0.5-1μL、5-10μM反向引物0.5-1μL、预扩增产物1-2μL、用水补足至25μL；PCR反应条件为：①94℃，5min预变性；②94℃，30s变性；③55℃，30s退火；④72℃，35s延伸；循环②至④35次；⑤72℃，5min；测序检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 昆明理工大学 用于检测微量组织中PDGFRA基因突变的引物组合及其应用