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申请/专利权人：南通大学

摘要：本发明提供一种静脉血中LEPAPN比值的测得方法，包括如下步骤：（1）试剂准备：LEP、APN检测ELISA试剂盒；（2）仪器准备：（2‑1）酶标分析仪；（2‑2）超低温冰箱；（2‑3）台式离心机；（3）实验操作：（3‑1）标本收集：真空负压管收集入选受试者的清晨空腹静脉血，静置30min后，利用台式离心机以3000rpm的速度离心10min后分离血清，置于‑80℃超低温冰箱保存，待检LEP、APN；（3‑2）应用ELISA法测定血清APN及LEP水平；（3‑3）根据结果计算LEPAPN比值。本发明采用血液标本检测，样本采集简单方便，可以最大程度的降低患者不配合情况的发生。

主权项：1.一种静脉血中LEPAPN比值的测得方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）试剂准备：LEP、APN检测ELISA试剂盒；（2）仪器准备（2-1）酶标分析仪；（2-2）超低温冰箱；（2-3）台式离心机；（3）实验操作（3-1）标本收集真空负压管收集入选受试者的清晨空腹静脉血，静置30min后，利用台式离心机以3000rpm的速度离心10min后分离血清，置于-80℃超低温冰箱保存，待检LEP、APN；（3-2）应用ELISA法测定血清APN及LEP水平准备：提前20分钟将试剂从超低温冰箱取出，平衡室温；配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水1:20稀释，备用；标准品的溶解：LEP标准曲线：每个标准品加入1.0ml标本通用稀释液，室温放置15分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀；浓度为2000pgml，然后依次稀释成1000pgml、500pgml、250pgml、125pgml、62.5pgml、31.25pgml和0pgml；APN标准曲线：每个标准品加入1.0ml标本通用稀释液，室温放置15分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀，浓度为10ngml，然后依次稀释成5ngml、2.5ngml、1.25ngml、0.625ngml、0.31ngml、0.15ngml和0ngml；编号：将样本对应微孔按序编号；加样：检测APN时，血清用1:2500试剂配套通用稀释液稀释待用，LEP直接加样，分别在相应的孔中加入空白、标准品和待测样本100μl，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置37℃温育90分钟；洗涤：将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；加生物化素抗体：提前20分钟用生物化抗体稀释液1:30稀释浓缩生物化素抗体配置生物素化抗体工作液，每孔加生物化素抗体100μl，用封板膜封板后置37℃温育60分钟；洗涤：将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；加酶：提前20分钟用酶结合物稀释液1:30稀释浓缩酶结合物配置酶结合物工作液；每孔加入酶结合物100μl，轻轻振荡混匀，用封板膜封板后置37℃，温育30分钟；洗涤：将孔内液体甩干，用洗涤液充分洗涤5遍，扣干；显色：每孔加入显色液A、B液各100μl轻轻振荡混匀，37℃避光显色15分钟；测定：每孔加终止液100μl，轻拍混匀，设定酶标分析仪波长450nm，用空白孔调零后测定各孔OD值；数据处理：使用多项式线性拟和方式进行数据处理，以各校准品扣除本底的OD值为纵坐标，各校准品的浓度为横坐标作图，得到标准曲线，样本中的LEP、APN的浓度根据标准曲线计算得出；（3-3）根据结果计算LEPAPN比值。

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百度查询： 南通大学 一种静脉血中LEP/APN比值的测得方法