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申请/专利权人：陕西师范大学
摘要：本发明属于胶质瘤技术，具体涉及一种应用CRISPRCas9和splitGFP双分子荧光互补技术标记胶质瘤干细胞标志物LGR5的方法及试剂盒，克服因缺乏高特异性的抗体，使得现有方法无法准确检测LGR5在GSCs中的内源蛋白表达水平的难题。本发明巧妙的应用CRISPRCas9技术用较小的亚基GFP11标记LGR5蛋白，同时构建稳定表达较大亚基GFP1‑10蛋白的GSCs。当两个片段在同一细胞内，这两个部分能够稳定地相互作用，产生具有发光功能的GFP，从而可检测胶质瘤干细胞中的LGR5内源表达水平。其检测方法稳定性好，便于推广。
主权项：1.一种应用CRISPRCas9和splitGFP双分子荧光互补技术标记胶质瘤干细胞标志物LGR5的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、设计可靶向LGR5基因的体外转录的sgRNA；步骤2、构建蛋白质核酸复合物；将重组蛋白Cas9与可靶向LGR5基因的体外转录的sgRNA组装为蛋白质核酸复合物；步骤3、构建含有GFP11序列的单链DNA序列；在GFP11序列的左右两端分别添加一段碱基序列，该段碱基序列与LGR5部分序列同源；步骤4、构建稳定表达GFP1-10的胶质瘤干细胞GSCs；步骤5、利用共转染技术将步骤2构建的蛋白质核酸复合物与步骤3构建的含有GFP11的单链DNA序列共同转入到步骤4构建的稳定表达GFP1-10的胶质瘤干细胞GSCs中，GFP1-10蛋白和GFP11蛋白整合成一个完整的，具有发光功能的绿色荧光蛋白，实现胶质瘤干细胞中内源LGR5蛋白标记。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 陕西师范大学 应用CRISPR/Cas9和split GFP双分子荧光互补技术标记胶质瘤干细胞标志物LGR5的方法及试剂盒
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