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摘要：本发明属于肿瘤免疫治疗领域，具体公开了一种GPC3‑CAR‑NKT细胞的制备方法及其应用；本发明建立了一种能高效扩增制备GPC3‑CAR‑NKT细胞的工艺，为基于NKT细胞的免疫疗法研究提供了坚实的基础，可实现临床级别的CAR‑NKT细胞制备；同时，本发明还证明了CAR工程化可以增强NKT细胞的抗肿瘤活性，证明了CAR‑NKT细胞用于肝脏实体瘤治疗的可行性，因此本发明公开的GPC3‑CAR‑NKT细胞及其制备方法可应用于针对肿瘤的免疫药物——特别是以实体肿瘤细胞为靶向细胞的药物的研发和制备。
主权项：1.一种GPC3-CAR-NKT细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）NKT细胞的制备；2）GPC3CAR慢病毒载体构建；3）GPC3CAR慢病毒制备；4）GPC3-CAR-NKT细胞制备及表型检测；所述2）GPC3CAR慢病毒载体构建包括以下步骤：合成编码GM-CSFRα信号肽基因序列，GPC3抗体轻链可变区VL基因序列、Linker基因序列、GPC3抗体重链可变区VH基因序列、IgG4Fc基因序列、CD28跨膜区基因序列、CD28共刺激结构域基因序列以及CD3ζ胞内信号传导结构域基因序列，并将其亚克隆至LV-EF1α-MCS-kana载体，通过测序验证序列正确的克隆载体用于慢病毒包装制备；所述GM-CSFRα信号肽氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；所述GPC3抗体轻链可变区VL氨基酸序列如SEQIDNO：3所示；所述Linker氨基酸序列如SEQIDNO：5所示；所述GPC3抗体重链可变区VH氨基酸序列如SEQIDNO：7所示；所述IgG4Fc氨基酸序列如SEQIDNO：9所示；所示CD28跨膜区氨基酸序列如SEQIDNO：11所示；所述CD28共刺激结构域氨基酸序列如SEQIDNO：13所示；所述CD3ζ胞内信号传导结构域氨基酸序列如SEQIDNO：15所示。
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百度查询： 赛业(苏州)生物科技有限公司 一种GPC3-CAR-NKT细胞的制备方法及其应用
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