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申请/专利权人：上海新微技术研发中心有限公司
摘要：本发明涉及一种特异性霍乱毒素毒力基因快速荧光PCR检测试剂盒及其检测方法。本发明试剂盒包括PCR反应缓冲液、酶混合液、两对正、反引物、两条探针组成，两对引物和两条探针分别根据霍乱弧菌毒力基因ctxA和人基因组RnaseP基因诊断序列设计；此外本发明优化PCR反应体系和条件来提高其检测敏感性，通过荧光PCR仪实时监测扩增结果。本发明荧光PCR检测试剂盒设计严谨，操作简单，灵敏度高，特异性强，特异性快速鉴定霍乱毒素CTX毒力基因，整个PCR检测时间较短，结果判定精确度高。
主权项：1.一种特异性霍乱毒素毒力基因快速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，包括如下试剂：1PCR反应液：包括PCR反应缓冲液，一对霍乱弧菌CTX特异性的正、反引物，一对内标特异性的正、反引物，一条霍乱弧菌CTX特异性的荧光探针，一条内标特异性的荧光探针；霍乱弧菌CTX特异性引物和探针根据霍乱弧菌ctxA设计得到，内标特异性引物和探针根据人类基因组RnaseP基因序列设计得到；荧光探针由荧光报告基团与荧光淬灭基团双色标记；2酶混合液：包括Taq酶、UNG酶和甘油3阳性对照：包括霍乱弧菌CTX毒力基因DNA片段和人基因组DNA片段4阴性对照：包括人基因组DNA片段所述1中霍乱弧菌多核苷酸扩增的一对正、反引物、内标特异性多核苷酸扩增的一对正、反引物的序列件序列表SEQIDNO.1-4；正向引物1：SEQIDNO.1；反向引物1：SEQIDNO.2；正向引物2：SEQIDNO.3；反向引物2：SEQIDNO.4；所述1中用于荧光PCR扩增的霍乱弧菌CTX探针和内标特异性探针序列分别见序列表SEQIDNO.5-6。
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