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申请/专利权人：中南林业科技大学
摘要：本发明提供了一种油桐愈伤组织遗传转化体系的建立方法。包括愈伤组织诱导、不定芽诱导、愈伤组织侵染等过程。本发明先以油桐下胚轴为外植体，对其愈伤组织诱导再生体系进行了优化，以诱导出的愈伤组织为材料，以pBI121为载体进行了遗传转化体系探索，成功建立了愈伤组织的遗传转化技术体系，且阳性苗植株转化率达22.86％，进而以FAD2基因为目的基因，构建RNAi载体；并对已构建的载体进行验证。最终证明，该方法操作简单、所需时间短、转化效率稳定，阳性植株转化率高达7.84％。本发明在油桐的遗传转化技术体系研究中取得了突破性进展，为油桐基因功能的研究及分子育种提供了技术支撑。
主权项：1.一种油桐愈伤组织遗传转化体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：1愈伤组织诱导：取无菌苗的下胚轴，将其切成小段，按照形态学上端在上的原则，接种到WPM+1.0-3.0mgLZT+0-2.0mgL6-BA+0.2-0.8mgLIAA的培养基中，27±2℃下先暗培养2-4d，再转移到光照条件下培养12-22d，光照强度为2200-2300lx，每天光照时间8-10hd，得到愈伤组织；2侵染愈伤：将步骤1获得的愈伤组织放入农杆菌菌液浸泡8-12min，用无菌水清洗3-5遍后，均匀放置直至愈伤组织表面被吹干；3共培养：将表面吹干的愈伤组织放入装有无菌水湿润滤纸的培养皿中，封口后置于27±2℃下暗培养2-4d；4筛选培养：共培养结束后，将培养皿中的愈伤组织转移到12MS+0-1.5mgL6-BA+1.5-2.5mgLZT+0-0.5mgLIAA+20-50mgLKan的培养基中进行首次筛选培养，27±2℃下光照培养3-7d，光照强度为2800-3000lx，光照时间为8-10hd；5二次筛选培养：在第一次筛选结束后，将未死亡愈伤组织转移到12MS+0-1.5mgL6-BA+1.5-2.5mgLZT+0-0.5mgLIAA+40-50mgLKane+40-50mgLTim+100-200mgLCef的二次筛选培养基中，27±2℃下光照培养直至长出不定芽，光照强度为2800-3000lx，光照时间为8-10hd。
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百度查询： 中南林业科技大学 一种油桐愈伤组织遗传转化体系的建立方法
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