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一种基于高效液相色谱法测定牛痘病毒加帽酶活性的方法 

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申请/专利权人:上海领康时代生物技术有限公司

摘要:本发明提供一种基于高效液相色谱法测定牛痘病毒加帽酶活性的方法,涉及牛痘病毒加帽酶活性检测技术领域,以GTP作为反应底物、SAM作为甲基供体、牛痘病毒加帽酶作为催化酶,在反应底物、甲基供体添加量不变的情况下,催化酶添加量依次设定成不同,分别在相同的CappingBuffer体系中共反应,进行多个生成S‑腺苷高半胱氨酸的催化反应,在催化反应的过程中,使用RP‑HPLC检测在相同时间下牛痘病毒加帽酶不同量时S‑腺苷高半胱氨酸的生产量,将S‑腺苷高半胱氨酸的生产量检测结果与不同催化酶添加量使用线性拟合得出可计算牛痘病毒加帽酶活性结果的方程式,并间接计算出检测样品酶活。相较于现有技术,本方法解决了仪器昂贵、放射性污染、稳定性、重复性等问题。

主权项:1.一种基于高效液相色谱法测定牛痘病毒加帽酶活性的方法,其特征在于,所述方法为:以三磷酸鸟苷作为反应底物、S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体、牛痘病毒加帽酶作为催化酶,在反应底物、甲基供体添加量不变的情况下,催化酶添加量依次设定成不同,分别在相同的CappingBuffer体系中共反应,进行多个生成S-腺苷高半胱氨酸的催化反应,在催化反应的过程中,使用RP-HPLC检测在相同时间下牛痘病毒加帽酶不同量时S-腺苷高半胱氨酸的生产量,将S-腺苷高半胱氨酸的生成量检测结果与不同催化酶添加量使用线性拟合得出可计算牛痘病毒加帽酶活性结果的方程式,并间接计算出检测样品酶活。

全文数据:

权利要求:

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