买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：河南农业大学

摘要：本发明公开了一种鸡小肠类器官的培养基及培养方法，涉及类器官培养技术领域，该培养基主要包括：L‑WNR条件培养基、基础培养基、Wnt通路激活剂R‑Spondin‑1、BMP受体抑制剂Noggin、ROCK抑制剂Y‑27632、p38MAPK抑制剂SB202190、TGF‑β受体I型TGF‑βRI激酶抑制剂LY2157299、Laduviglusib具有口服活性的GSK‑3αβ抑制剂和Wntβ‑catenin信号通路激活剂和Notch信号激活剂Jagged‑1，以及其他特异性添加因子，该方法采用多种抗生素对小肠组织进行清洗，使用EDTA进行消化和涡旋振荡仪来分离小肠中的绒毛和隐窝，获得大量干净且密度高的肠隐窝细胞，大大提高了鸡小肠类器官样本的培养成功率，并减少污染。结合类器官的传代、冻存技术可以在有限时间内获得充足的类器官开展科学研究。

主权项：1.一种鸡小肠类器官的培养基及培养方法，包括分子培养基由L-WNR条件培养基和基础培养基组成，其特征在于：所述L-WNR条件培养基在分子培养基中的体积百分比浓度为50％，其余为基础培养基含10％胎牛血清和1％青霉素链霉素双抗；所述L-WNR条件培养基包括如下步骤制备而成：1制备L-WNR培养基：将10％胎牛血清、DMEM高糖培养基、1％青霉素链霉素双抗、0.5mgmLG418和0.5mgmL潮霉素B，按比例混匀，4℃保存备用；2在T75细胞培养瓶中加入预冷的19mLL-WNR培养基；3将冻存的L-WNR细胞加入预冷的L-WNR培养基进行缓慢吹打解冻，1200rpm离心3min后，向沉淀中再加入1mL新鲜的L-WNR培养基得L-WNR细胞溶液；4将1mLL-WNR细胞溶液转移至步骤2准备的装有L-WNR培养基的T75细胞培养瓶中，于37℃、5％CO2的细胞培养箱连续培养2～3d，至细胞完全长满T75培养瓶贴壁融合为止；5移除T75培养瓶中的L-WNR细胞培养基；6向移除L-WNR细胞培养基后的T75培养瓶中加入2mL0.25％胰蛋白酶溶液含EDTA，使其均匀覆盖T75培养瓶内壁的细胞层表面，于37℃培养箱解离3～5min，1200rpm，离心3min后，弃去旧培养基，加入1mL新鲜的基础培养基，得细胞悬液；7将细胞悬液转移至新的T75细胞培养瓶，再加入19mL新鲜的基础培养基于T75细胞培养瓶，在37℃，5％CO2培养箱培养1-2d，直至细胞完全长满T75培养瓶贴壁融合为止；8经步骤7培养后，移除旧的基础培养基，再加入20mL新鲜的基础培养基，于37℃，5％CO2培养箱继续培养24h，即得第一条件培养基；9每24h收集一次每个T75培养瓶中的条件培养基到50mL离心管，然后向T75培养瓶中加入20mL新鲜的基础培养基后，于37℃，5％CO2培养箱继续培养，一般收集3-4次，即为第二、第三、第四条件培养基；10将收集的所有L-WNR条件培养基于培养瓶中混匀后，置50mL离心管中，2500rpm，室温离心5min，吸取上清液至储存瓶中，于4℃保存；11将L-WNR条件培养基与基础培养基按体积比1:1混合，配制成体积百分比终浓度为50％的L-WNR条件培养基，可在-20℃保存一个月。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 河南农业大学 一种鸡小肠类器官的培养基及培养方法