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申请/专利权人：江苏省农业科学院

摘要：本发明涉及一种利用SSR分子标记检测大麦品种特异性的方法，包括：提取待测品种样品的DNA；用35对SSR荧光标记引物对待测品种模板DNA进行PCR扩增；PCR产物经毛细管电泳检测采集等位变异数据；然后利用PowerMarker软件对采集的数据进行聚类；计算待测品种与其聚类最近的已知品种间的差异位点数量，当差异位点数2时，判定待测品种具备特异性，当差异位点数≤2，判定待测品种与该已知品种为“疑同品种”；该方法可实现高通量检测，在大麦品种特异性检测上具有更加高效、精确、成本低的优势。

主权项：1.一种利用SSR分子标记检测大麦品种特异性的方法，其特征在于，具体步骤如下：1提取待测大麦品种和或已知大麦品种DNA作为模板DNA，以35对SSR荧光标记引物为引物，分别进行PCR扩增，获得扩增产物；所述35对SSR荧光标记引物为：核苷酸序列分别如SEQINNO.1、SEQINNO.2所示的上游引物Bmag0211F和下游引物Bmag0211R；核苷酸序列分别如SEQINNO.3、SEQINNO.4所示的上游引物Bmag0770F和下游引物Bmag0770R；核苷酸序列分别如SEQINNO.5、SEQINNO.6所示的上游引物Bmag0382F和下游引物Bmag0382R；核苷酸序列分别如SEQINNO.7、SEQINNO.8所示的上游引物Bmag0378F和下游引物Bmag0378R；核苷酸序列分别如SEQINNO.9、SEQINNO.10所示的上游引物Bmag0711F和下游引物Bmag0711R；核苷酸序列分别如SEQINNO.11、SEQINNO.12所示的上游引物BmagHVM54F和下游引物HVM54R；核苷酸序列分别如SEQINNO.13、SEQINNO.14所示的上游引物Scssr07759F和下游引物Scssr07759R；核苷酸序列分别如SEQINNO.15、SEQINNO.16所示的上游引物HVM36F和下游引物HVM36R；核苷酸序列分别如SEQINNO.17、SEQINNO.18所示的上游引物EBmag0793F和下游引物EBmag0793R；核苷酸序列分别如SEQINNO.19、SEQINNO.20所示的上游引物Bmac0209F和下游引物Bmac0209R；核苷酸序列分别如SEQINNO.21、SEQINNO.22所示的上游引物Bmag0877F和下游引物Bmag0877R；核苷酸序列分别如SEQINNO.23、SEQINNO.24所示的上游引物HVM27F和下游引物HVM27R；核苷酸序列分别如SEQINNO.25、SEQINNO.26所示的上游引物HVM60F和下游引物HVM60R；核苷酸序列分别如SEQINNO.27、SEQINNO.28所示的上游引物EBmac0708F和下游引物EBmac0708R；核苷酸序列分别如SEQINNO.29、SEQINNO.30所示的上游引物HVM62F和下游引物HVM62R；核苷酸序列分别如SEQINNO.31、SEQINNO.32所示的上游引物EBmac0701F和下游引物EBmac0701R；核苷酸序列分别如SEQINNO.33、SEQINNO.34所示的上游引物EBmac0635F和下游引物EBmac0635R；核苷酸序列分别如SEQINNO.35、SEQINNO.36所示的上游引物Bmag0353F和下游引物Bmag0353R；核苷酸序列分别如SEQINNO.37、SEQINNO.38所示的上游引物HVM40F和下游引物HVM40R；核苷酸序列分别如SEQINNO.39、SEQINNO.40所示的上游引物Bmac0181F和下游引物Bmac0181R；核苷酸序列分别如SEQINNO.41、SEQINNO.42所示的上游引物Bmag0808F和下游引物Bmag0808R；核苷酸序列分别如SEQINNO.43、SEQINNO.44所示的上游引物Scssr10148F和下游引物Scssr10148R；核苷酸序列分别如SEQINNO.45、SEQINNO.46所示的上游引物Scssr03907F和下游引物Scssr03907R；核苷酸序列分别如SEQINNO.47、SEQINNO.48所示的上游引物Scssr07106F和下游引物Scssr07106R；核苷酸序列分别如SEQINNO.49、SEQINNO.50所示的上游引物Bmag0387F和下游引物Bmag0387R；核苷酸序列分别如SEQINNO.51、SEQINNO.52所示的上游引物Bmag0223F和下游引物Bmag0223R；核苷酸序列分别如SEQINNO.53、SEQINNO.54所示的上游引物Bmag0009F和下游引物Bmag0009R；核苷酸序列分别如SEQINNO.55、SEQINNO.56所示的上游引物Bmag0867F和下游引物Bmag0867R；核苷酸序列分别如SEQINNO.57、SEQINNO.58所示的上游引物Bmac0018F和下游引物Bmac0018R；核苷酸序列分别如SEQINNO.59、SEQINNO.60所示的上游引物Scssr09398F和下游引物Scssr09398R；核苷酸序列分别如SEQINNO.61、SEQINNO.62所示的上游引物Bmag0613F和下游引物Bmag0613R；核苷酸序列分别如SEQINNO.63、SEQINNO.64所示的上游引物Scssr05599F和下游引物Scssr05599R；核苷酸序列分别如SEQINNO.65、SEQINNO.66所示的上游引物HVCMAF和下游引物HVCMAR；核苷酸序列分别如SEQINNO.67、SEQINNO.68所示的上游引物EBmac0603F和下游引物EBmac0603R核苷酸序列分别如SEQINNO.69、SEQINNO.70所示的上游引物Scssr15864F和下游引物Scssr15864R；所述上游引物的5’端均连接荧光基团；2PCR产物经毛细管电泳检测采集等位变异数据；3利用PowerMarker软件对采集的数据进行聚类；4计算待测大麦品种与其聚类最近的已知大麦品种间的差异位点数量，当差异位点数2时，判定待测大麦品种具备特异性，当差异位点数≤2，判定待测大麦品种与该已知大麦品种为“疑同品种”。

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