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申请/专利权人：广州医科大学附属第三医院(广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院)
摘要：本发明涉及一种HBB基因突变细胞及其应用。该HBB基因突变细胞的制备方法包括以下步骤：使用RNP复合体靶向切割红系细胞的基因组DNA的HBB基因，RNP复合体包括Cas9蛋白与核苷酸序列如SEQIDNO:1所示的sgRNA；及使用含有HBB基因CD41‑42‑CTTT突变位点的单链核苷酸对上述靶向切割后的红系细胞的基因组DNA进行同源重组修复，制备HBB基因突变细胞。上述HBB基因突变细胞，能够在体外很好地模拟β‑地中海贫血病人的红细胞，作为一种地中海贫血细胞模型，为地中海贫血的基因治疗的研究提供理想的细胞研究工具，避免了伦理问题和对人体的创伤，且能长期稳定地在体外进行实验研究。
主权项：1.一种HBB基因突变细胞的制备方法，其特征在于，所述HBB基因突变细胞的制备方法包括以下步骤：使用RNP复合体靶向切割红系细胞的基因组DNA的HBB基因，所述RNP复合体包括Cas9蛋白与核苷酸序列如SEQIDNO:1所示的sgRNA；及使用含有HBB基因CD41-42（-CTTT）突变位点的单链核苷酸对所述靶向切割后的红系细胞的基因组DNA进行同源重组修复，制备HBB基因突变细胞；所述RNP复合体和所述单链核苷酸通过电穿孔法转染进入所述红系细胞；所述红系细胞为HUDEP-2细胞；所述单链核苷酸的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示；所述电穿孔法采用的参数包括：电压1450V，方波脉冲宽度为10ms，方波脉冲次数3次；其中，所述Cas9蛋白、所述sgRNA、所述单链核苷酸与所述红系细胞的比例为1nmol：2.5nmol：50nmol：2.0×105个。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广州医科大学附属第三医院(广州重症孕产妇救治中心、广州柔济医院) HBB基因突变细胞及其应用
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