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申请/专利权人：重庆市渝东南农业科学院(重庆市涪陵榨菜研究所)
摘要：本发明属于生防菌B18检测技术领域，公开了一种土壤中根肿病生防菌B18的检测方法及应用，首先基于B18gyrA基因设计特异性引物探针，优化反应条件，建立了B18微滴式数字PCR检测体系；该检测体系可特异性检测出B18，而对其它细菌检测结果为阴性，且灵敏度高，其检测下限可达0.69copiesμL，本发明还可以对土壤DNA样品中的B18进行绝对定量。本发明采用微滴式数字PCR技术对B18在土壤中的菌量变化进行实时监测，明确其在田间的消长规律，同时结合依托作物的发病程度及产量，其结果将为B18在田间的精准施用及后续的推广应用提供切实可靠的理论依据。
主权项：1.一种土壤中根肿病生防菌B18的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，设计生防菌特异性引物及探针：采用质粒提取试剂盒Omega提取重组的克隆质粒，质粒PCR反应检测，紫外分光光度计测质粒浓度并进行测序；将测序序列在NCBI上比对后下载相应序列，根据此序列，利用在线引物设计工具设计gyrA基因特异性引物及探针；步骤二，B18引物探针特异性检测：利用设计好的引物探针以B18基因组DNA为阳性对照，其他供试细菌菌株基因组DNA为阴性对照，数字PCR扩增，检测引物的扩增特异性；步骤三，土样中B18菌量测定：将采集的土样用土壤DNA提取试剂盒提取土壤总DNA，用优化好的数字PCR反应体系进行扩增，根据公式算出土样中B18含量C1。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 重庆市渝东南农业科学院(重庆市涪陵榨菜研究所) 一种土壤中根肿病生防菌B18的检测方法及应用
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