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申请/专利权人：四川农业大学
摘要：本发明属于细胞生物学领域，具体涉及白芷原生质体高效瞬时转化的方法，包括以下步骤：S1、将待转化的外源基因DNA溶液和原生质体溶液进行混合；其中，外源DNA质粒的高纯度为吸光度值OD260OD280＝1.6‑2.0，高浓度为0.5‑1.5μgμl，外源基因DNA的用量为7.5‑12.5μg，原生质体溶液的浓度范围为2×104‑2×106个mL；S2、将浓度为45‑55％的PEG‑Ca2+溶液加入步骤S1得到的混合液中，于20‑26℃黑暗条件下转化25‑35min；S3、往孵育转化后的混合液中加入W5溶液以终止转化，离心后去除上清液，再加入W5溶液将管底的原生质体重悬，进一步在24‑32℃条件下黑暗孵育14‑16h即可。本发明的瞬时转化方法周期短、操作便捷、效率高，弥补了传统遗传转化方式的缺点。
主权项：1.白芷原生质体高效瞬时转化的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将待转化的重组质粒溶液和原生质体溶液进行混合；其中，所述重组质粒溶液的纯度为吸光度值OD260OD280＝1.6-2.0，所述重组质粒溶液的浓度为0.5-1.5μgμl，所述重组质粒溶液的用量为7.5-12.5μg，原生质体溶液的浓度范围为2×104-2×106个mL，所述重组质粒溶液的质量和原生质体的个数比范围为1μg:2×104个-2×106个；S2、将PEG-Ca2+溶液加入步骤S1得到的混合液中，并混合均匀，于20-26℃黑暗条件下转化25-35min；其中，PEG-Ca2+溶液的浓度为45-55％；S3、往孵育转化后的混合液中加入W5溶液以终止转化，离心后去除上清液，再加入W5溶液将管底的原生质体重悬，置于24-32℃培养箱中黑暗孵育14-16h；其中，步骤S1中，所述混合均匀的方法为：使用剪尖移液枪枪头轻轻吸打，避免产生气泡，直至混匀。
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