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申请/专利权人:华中农业大学
摘要:本发明公开了一种竞争型草鱼泌乳素prolactin,PRL检测试剂盒及应用。属于生物技术领域。包括:草鱼PRL抗体、草鱼PRL蛋白标准品、PRL示踪剂、涂板液、清洗液、阻断液、催化液、终止液、荧光检测剂A、荧光检测剂B。本发明还公开了检测方法,本发明试剂盒以生物素标记的草鱼PRL抗原为示踪剂,采用竞争性荧光免疫方法对草鱼PRL进行定量检测,具有更高的检测灵敏度和特异性,并且成本低,所得检测数据稳定、准确。可以检测草鱼血清、垂体裂解液或培养液等样品中的泌乳素浓度,检测灵敏度可以达到0.488ngmL,为草鱼泌乳素的研究提供了有效的检测手段。
主权项:1.一种竞争型草鱼泌乳素检测试剂盒,其特征在于,包括草鱼PRL抗体,所述草鱼PRL抗体的制备方法为将纯化的重组PRL蛋白作为抗原,制备多克隆抗血清,纯化即得;所述重组PRL蛋白由以下步骤制备得到:(1)扩增SEQIDNO:3所示基因片段;(2)利用步骤(1)所得基因片段构建重组质粒,转化大肠杆菌,诱导表达,纯化;步骤(1)中扩增SEQIDNO:3基因片段的PCR引物对为:上游引物:5’-CGGAATTCATGGTCGGTCTGAATGATTTACTGG-3’,如SEQIDNO.1所示;下游引物:5’-CCGCTCGAGCTACTAGCACATCTCAGGTCTCTTC-3’,如SEQIDNO.2所示;步骤(2)中构建重组质粒所用表达载体为pET-28a+;所述大肠杆菌为BL21感受态细胞;步骤(2)所述诱导表达的条件为28℃,0.5mMIPTG,8h;所述检测试剂盒还包括草鱼PRL蛋白标准品、PRL示踪剂、涂板液、清洗液、阻断液、催化液、终止液、荧光检测剂A和荧光检测剂B。
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百度查询: 华中农业大学 一种竞争型草鱼泌乳素检测试剂盒及应用
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