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申请/专利权人:新疆农业科学院植物保护研究所;中国检验检疫科学研究院;新疆维吾尔自治区植物保护站
摘要:本发明属于分子检测鉴定技术领域,公开了一种甜瓜迷实蝇RPA‑CRISPRCas检测试剂盒和方法,其中,Cas蛋白为cas12,所述试剂盒包括RPA引物和crRNA。本发明开发基于重组酶聚合酶扩增技术RPA结合成簇规律间隔短回文重复序列及CRISPR相关蛋白系统——CRISPRCas12a的甜瓜迷实蝇现场可视化快速检测技术,可在37‑42℃恒温条件下进行反应,无需复杂的仪器设备,CRISPRCas12a可识别并切割特定核酸序列,从而在RPA基础上进一步增加检测的特异性和灵敏度,对甜瓜迷实蝇的早期发现和入侵防控具有重要作用。
主权项:1.一种甜瓜迷实蝇RPA-CRISPRCas检测试剂盒,其特征在于:Cas蛋白为cas12,所述试剂盒包括RPA引物和crRNA,所述RPA引物为引物组合MparFMparR,所述crRNA选自Mp-crRNA1、Mp-crRNA2和Mp-crRNA3中的任一个,序列如下:MparF:5’-CCTAATATTGGGAGCTCCAGATATGGCTTTTCCA-3’,MparR:5’-AGCTCCTCTATGTGCAATAACTGATGAAAGAGGG-3’,Mp-crRNA1:UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUAUUAUUACCCCCUUCUCUUA,Mp-crRNA2:UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUAUUAUUACCCCCUUCUCUUACAUUAU,Mp-crRNA3:UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUCCCCCUUCUCUUACAUUAUU。
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权利要求:
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