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申请/专利权人：中国农业科学院茶叶研究所;恒枫食品科技有限公司

摘要：本发明一种双酯型儿茶素类化合物及制备方法，步骤为：将茶叶与甲醇水溶液混合，超声提取得茶叶提取液；将茶叶提取液连续进行反相液相色谱分离，通过收集特定洗脱液及特定时间段的馏分最终得到得到双酯型儿茶素类化合物，该制备方法得到epigallocatechin‑3,4'‑di‑O‑gallate及首次通过分离纯化得到gallocatechin‑3,4'‑di‑O‑gallate，双酯型儿茶素类化合物纯度高。

主权项：1.一种双酯型儿茶素类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1将茶叶与甲醇水溶液混合，超声提取，过滤得到茶叶提取液；2室温条件下，将步骤1的茶叶提取液进行反相液相色谱分离，收集，收集15min-20min段馏分，得到第一馏分物；将第一馏分物置于冰箱内预冻3h-5h，转移至真空冷冻干燥机，减压冻干移除溶剂，得到样品粗组分；色谱分离条件：以0.05％三氟乙酸水溶液为流动相A相，以甲醇为流动相B相；流动相梯度洗脱方式为0min-10min，8％-15％流动相B相；10min-40min，15％-25％流动相B相；40min-45min，25％-100％流动相B相；45min-60min，100％流动相B相；流速为80mLmin，进样量为125mL；填料为十八烷基键合固定相；3室温条件下，将样品粗组分进行反相液相色谱分离，根据馏分液相制备谱图的色谱峰型收集馏分，收集19min-21.5min段洗脱色谱峰，得到第二馏分物；将第二馏分物置于冰箱内预冻3h-5h，转移至真空冷冻干燥机，减压冻干移除溶剂，得到儿茶素精细组分；色谱分离条件：以0.05％三氟乙酸水溶液为流动相A相，以乙腈为流动相B相；流动相梯度洗脱方式为0min-25min，15％-30％流动相B相；25min-30min，30％-95％流动相B相；30min-40min，95％流动相B相；流速为80mLmin，进样量为20mL；填料为十八烷基键合固定相；4室温条件下，将儿茶素精细组分进行反相液相色谱分离，根据馏分液相制备谱图的色谱峰型收集馏分，收集27min-30min和37min-39min段洗脱色谱峰，分别得到第三馏分物和第四馏分物；将第三馏分物和第四馏分物分别置于冰箱内预冻3h-5h，转移至真空冷冻干燥机，减压冻干移除溶剂，得到双酯型儿茶素类化合物；双酯型儿茶素类化合物为epigallocatechin-3,4'-di-O-gallate和gallocatechin-3,4'-di-O-gallate；色谱分离条件：以0.05％三氟乙酸水溶液为流动相A相，以甲醇为流动相B相；流动相梯度洗脱方式为0min-20min，25％流动相B相；20min-30min，25％-35％流动相B相；30min-45min，35％流动相B相；流速为80mLmin，进样量为80mL；填料为十八烷基键合固定相。

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