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申请/专利权人：苏州晶睿生物科技有限公司
摘要：本发明公开了一种用于筛选T7RNA聚合酶是否产生dsRNA的检测方法、核酸序列组合、核酸序列与荧光染料组合及其应用。所述检测方法有以下步骤：反应体系配制→加入T7RNA聚合酶突变体→荧光检测→根据荧光检测结果进行后续步骤。本发明能高效区分T7RNA聚合酶的突变体是否能形成dsRNA，可以应用于T7RNA聚合酶突变体的高通量快速筛选，成本低，效率高。本发明还可用于T3RNA聚合酶、SP6RNA聚合酶、VSW‑3RNA聚合酶的突变体是否能形成dsRNA的检测。
主权项：1.一种筛选T7RNA聚合酶是否产生dsRNA的检测方法，其特征在于，所述检测方法有以下步骤：反应体系配制：反应体系含有10-50mMTris-HAc，pH6.0-8.8，3-50mMMgCl2，0-5mM亚精胺，0-50mMNaCl，0.1-5mMKCl，0-30mMDTT，0-200μgmlBSA，0-5%DMSO，0-0.05%TritonX-100，0-8%聚乙二醇PEG8000，0.2-10mM每种核糖核苷三磷酸，即0.8-40mM总rNTP，0.25-10μM合成GV-DNA探针模板，0-0.025U无机焦磷酸酶和3-200μMDFHBI-1T染料；向反应体系中加入0.5-20μM的T7RNA聚合酶突变体；荧光检测；根据荧光检测结果进行后续步骤：如果荧光值增加，则表明T7RNA聚合酶突变体产生dsRNA的活性低→进行下一轮筛选；如果荧光值下降，或者先上升然后持续下降，最终得到低于荧光染料本底的荧光值，则表明T7RNA聚合酶突变体产生dsRNA的活性高→停止筛选。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 苏州晶睿生物科技有限公司 一种筛选T7RNA聚合酶是否产生dsRNA的检测方法、核酸序列组合及其应用
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