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申请/专利权人：中乔健工生物科技(广东)有限公司
摘要：本申请公开了一种脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法及培养基，涉及生物技术领域，具体包括如下步骤：S1.细胞培养：将脐带间充质干细胞接种于培养瓶中，接种密度为1×104cellscm2；加入10ml配制好的外泌体分泌培养基；S2.外泌体收集：当细胞融合度达到80％‑90％时，收集培养上清液；S3.外泌体分离：初步离心；次级离心；超速离心，收集沉淀物，即为外泌体沉淀；用PBS重悬外泌体沉淀，置于‑70～‑80℃环境下保存；解决了细胞培养过程中铁离子供应不稳定，影响外泌体的产量和纯度，避免过量或不足对细胞造成的不利影响，提高外泌体的产量和纯度，增强了制备过程的精确性和可控性。
主权项：1.一种脐带间充质干细胞外泌体的培养分离方法，其特征在于，具体包括如下步骤：S1.细胞培养：将脐带间充质干细胞接种于培养瓶中，接种密度为1×104cellscm2；加入配制好的外泌体分泌培养基，外泌体分泌培养基包含转铁蛋白和硝酸铁，并每一段时间检测铁离子浓度并补充硝酸铁；于37℃，5％CO2培养箱中培养，培养基每2-3天更换一次；S2.外泌体收集：当细胞融合度达到80％-90％时，收集培养上清液，用0.22μm滤膜过滤上清液，去除细胞碎片和杂质；S3.外泌体分离：初步离心：将滤过的上清液以300×g离心10分钟，去除细胞和大颗粒物质；次级离心：将上清液以2000×g离心20分钟，去除细胞碎片；超速离心：将上清液以100,000×g离心70分钟，收集沉淀物，即为外泌体沉淀；用PBS重悬外泌体沉淀，置于-70～-80℃环境下保存。
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权利要求：
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