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申请/专利权人：成都益明通科技有限公司

摘要：本发明提供一种9－叠氮基‑9－脱氧‑N－羟乙酰神经氨酸的合成工艺，涉及9－叠氮基‑9－脱氧‑N－羟乙酰神经氨酸合成技术领域。基于一种9－叠氮基‑9－脱氧‑N－羟乙酰神经氨酸的合成工艺，包括以下步骤：S1.合成ManNGcAc；S2.合成Neu5GcAc；S3.合成1‑Met‑Neu5GcAc；S4.合成1‑Met‑9‑Ts‑Neu5GcAc；S5.合成9‑N3‑Neu5GcAc；S6.合成9AzNeu5Gc。通过以甘露糖为原料，与乙酰氧基氯反应生成ManNGcAc，在KH2PO4缓冲液中与丙酮酸钠反应生成Neu5GcAc，在甲醇溶剂中，5－乙酰氧基乙酰胺‑3,5－双脱氧‑D－丙三氧基‑D－寡糖‑2－壬基酮糖酸与三氟乙酸反应生成1‑Met‑Neu5GcAc，在氮气环境下吡啶作为溶剂，与对甲苯磺酰氯反应生成1‑Met‑9‑Ts‑Neu5GcAc，在氮气环境下，丙酮和水的混合溶液作为溶剂，加入叠氮化钠进行反应，生成9‑N3‑Neu5GcAc，在甲醇溶液中与甲醇钠反应生成9AzNeu5Gc。

主权项：1.一种9－叠氮基-9－脱氧-N－羟乙酰神经氨酸的合成工艺，其特征在于：包括以下步骤：S1.合成化合物N－乙酰氧基乙酸-D－甘露糖胺ManNGcAcA.将甘露糖加入容器中，加入HCl水溶液，使其溶解，并放在恒温磁力搅拌器上，在60℃下搅拌过夜，将反应过夜后的溶液在旋转蒸发仪上干燥残渣除去溶剂得到化合物；B.将乙腈和水混合加入得到的化合物中使其溶解，然后在冰浴下使其温度降至0℃下后加入NaHCO3；C.在反应混合物中加入乙酰氧基氯，在0℃下继续搅拌2小时，然后撤去冰浴，在室温下搅拌2小时，在混合物中加入甲醇，以去除溶剂，接着以乙酸乙酯：甲醇：水＝8:1:0.2的硅胶柱层析法对其进行纯化，得到产物ManNGcAc；S2.合成化合物5－乙酰氧基乙酰胺-3,5－双脱氧-D－丙三氧基-D－寡糖-2－壬基酮糖酸Neu5GcAcA.将一份N－乙酰氧基乙酸-D－甘露糖胺ManNGcAc和一份丙酮酸钠溶于80mL的KH2PO4缓冲液50mM中随后加入重组大肠杆菌K12醛缩酶；B.反应在37℃下持续震荡2天，产物经1M甲酸水溶液离子交换层析纯化，通过TLC监测，使用展开剂为DCM：MeOH＝1:1的极性进行爬板，Rf＝0.1，初步确定产物，得3.45gNeu5GcAc；S3.合成化合物1－甲基-5－乙酰氧基乙酰胺-3,5－双脱氧-D－丙三氧基-D－寡糖-2－壬基酮糖酸1-Met-Neu5GcAcA.向三口瓶中加入一份5－乙酰氧基乙酰胺-3,5－双脱氧-D－丙三氧基-D－寡糖-2－壬基酮糖酸Neu5GcAc和一份MeOH溶液使其溶解，三口瓶加装带温度计的橡皮塞和恒压滴液漏斗，放置在恒温磁力搅拌器上，将一份三氟乙酸加到恒压滴液漏斗中在5分钟内滴加到反应体系中，将溶液在室温下搅拌一夜；B.甲酯产品经硅胶柱层析法进行纯化，通过TLC监测，使用展开剂为DCM：MeOH＝4:1的极性进行爬板，Rf＝0.4，初步确定产物，得到2.17g白色粉末产物1-Met-Neu5GcAc；S4.合成化合物1－甲基-5－乙酰氧基乙酰胺-9－甲苯磺酰基-3,5,9－三氧基-D－丙三氧基-D－寡糖-2－壬基酮糖酸1-Met-9-Ts-Neu5GcAcA.每200mL的三口瓶中需要投入一份1-Met-Neu5GcAc，再加入一份干燥的吡啶使其溶解，三口瓶加装带温度计的橡皮塞和三通，三通绑上充满氮气的气球，用氮气置换三次，放在磁力搅拌器上，在二次承托盆中加入冰块，使反应体系温度冷却至0℃，待反应体系冷却至0℃后倒入0.86g对甲苯磺酰氯TsCl，继续搅拌，撤去冰水浴，使反应体系温度缓慢升至室温，搅拌过夜；B.产品经硅胶柱层析法进行纯化，通过TLC监测，使用展开剂为DCM：MeOH＝9:1的极性进行爬板，Rf＝0.5，初步确定产物，得到产率为50％的灰白色泡沫；S5.合成化合物5－乙酰氧基乙酰胺-9－叠氮基-3,5,9－三脱氧-D－丙三氧基-D－寡糖-2－壬基酮糖酸9-N3-Neu5GcAcA.将一份1-Met-9-Ts-Neu5GcAc加入100mL的三口瓶中，再加入30mL丙酮和10mLH2O使其溶解，再加入一份叠氮化钠，三口瓶加球形冷凝管和三通，三通绑上充满氮气的气球，用氮气置换三次，放在恒温磁力搅拌器上，温度调至80℃，反应体系在此温度下加热回流2天；B.粗产物经硅胶柱层析法进行纯化，通过TLC监测，使用展开剂为DCM：MeOH＝1:1的极性进行爬板，Rf＝0.1，初步确定产物，得到0.35g淡黄色粉末，得率为59％；S6.合成化合物9－叠氮基-9－脱氧-N－羟乙酰神经氨酸9AzNeu5GcA.在单口瓶中加入一份S5中得到的9-N3-Neu5GcAc，再加入MeOH溶液使其溶解，再加入MeONa，将单口瓶放在磁力搅拌器上搅拌15分钟。然后加入H离子交换树脂AmberliteIR120，将混合液的pH调至7.0，过滤得到黄色滤液；B.将滤液在旋转蒸发仪上干燥以除去溶剂，产物经硅胶柱层析法进行纯化，通过TLC监测，使用展开剂为DCM：MeOH＝1:1的极性进行爬板，Rf＝0.05，初步确定产物，确认产物得到收率78％的目标产品。

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