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摘要:本发明属于微生物基因工程技术领域,公开了一株发酵法生产γ‑氨基丁酸的地衣芽胞杆菌、及其构建方法和应用。申请人首次发现醛酮还原酶基因iolS的功能,将该基因在地衣芽胞杆菌敲除可以显著增加菌株发酵生产γ‑氨基丁酸的产量,同时通过改造其他基因,获得γ‑氨基丁酸生产能力大幅度提高的重组地衣芽胞杆菌。本发明所构建的地衣芽胞杆菌基因工程菌利用葡萄糖等廉价原料分批补料发酵72h后可生产62.9gL的γ‑氨基丁酸,葡萄糖转化率为0.5gg,具有良好的产业化前景。
主权项:1.一株发酵法生产γ-氨基丁酸的重组地衣芽胞杆菌,所述的重组地衣芽胞杆菌是将地衣芽胞杆菌中的黄嘌呤磷酸核糖转移酶基因xpt替换为了谷氨酸脱羧酶基因gadB,丙酮酸羧化酶基因pycA的启动子替换为了Pykza-rbs6,丙酮酸脱氢酶基因簇pdhABCD的启动子替换为了PbacA,柠檬酸合成酶基因citZ的启动子替换为了P43,α-酮戊二酸脱氢酶基因odhA的启动子替换为了PflgB,同时缺失了4-氨基丁酸转氨酶基因gabT、聚γ-谷氨酸合成基因簇capACB,和醛酮还原酶基因iolS;所述的谷氨酸脱羧酶基因gadB编码的蛋白GAD为SEQIDNO.2所示;启动子Pykza-rbs6的序列为SEQIDNO.4所示;启动子PbacA的序列为SEQIDNO.3所示;启动子P43的序列为SEQIDNO.5所示;启动子PflgB的序列为SEQIDNO.6所示。
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百度查询: 湖北大学 一株发酵法生产γ-氨基丁酸的地衣芽胞杆菌、及其构建方法和应用
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