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摘要：本发明公开了一种免疫磁珠富集结合荧光免疫层析检测A型肉毒毒素的方法，将BoNTA单克隆抗体与羧基化免疫磁珠偶联，制备得到特异性BoNTA免疫磁珠，从含有痕量BoNTA的样本中特异性富集检测靶标抗原，将收集捕获靶标抗原的免疫磁珠在一定条件下解离抗原，并结合镧系荧光免疫层析方法对其进行检测。
主权项：1.免疫磁珠富集结合荧光免疫层析检测A型肉毒毒素的方法，其特征在于，具体步骤如下：步骤1：将羧基化免疫磁珠与BoNTA单克隆抗体偶联备用；步骤2：取1～50μg步骤1制备的偶联BoNTA单克隆抗体的羧基化免疫磁珠于容器中，加入样本处理液，涡旋震荡充分混匀，磁力分离收集磁珠，弃上清液，重复进行2次，收集清洗后的羧基化免疫磁珠；步骤3：将样本稀释至样本处理液中，涡旋震荡混匀随后离心处理10min；取2mL上清液加入含有偶联BoNTA单克隆抗体的羧基化免疫磁珠的容器中，涡旋混匀，在37～42℃条件下孵育1～2h；随后将孵育后的混合物静置进行磁力分离，弃上清液，并加入50μL洗脱液，室温静置孵育，磁分离收集上清液，加入5μL中和液；其中，按照质量体积比计算，样本的加入量为10％；洗脱液为柠檬酸水溶液，其浓度不超过0.5molL；中和液为0.1molL的NaOH溶液；步骤4：取步骤3液体与试剂卡上样液按照质量比1:1混匀，随后滴加至BoNTA时间分辨荧光检测试剂卡加样孔中，层析反应10～20min，利用便携式高敏荧光分析仪对荧光信号进行检测并判读结果。
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