买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

摘要：本发明公开了免疫组化检测肝细胞癌内内毒素的方法，涉及免疫组化检测技术领域。本发明包括如下步骤：1切片：病理蜡块连续切片，厚度4μm；2拷片：将切片放摊片机上37℃烤片30min后放65℃烤箱1h；3脱蜡：将切片放入切片架，置入含二甲苯盒内，进行脱蜡，每缸10min，共3次；4水化：将切片用无水乙醇Ⅰ浸没5min、90％乙醇Ⅱ浸没3min、80％乙醇III浸没3min、蒸馏水浸没3min×2缸。本发明首次公开了免疫组化检测肝细胞癌内内毒素的方法，解决了免疫组化检测肝细胞癌内内毒素的技术难题，为肝细胞癌内内毒素水平定量提供了一种方法；肝细胞癌缺乏预后预测指标，本发明对分析内毒素对肝细胞癌预后影响奠定了基础。

主权项：1.免疫组化检测肝细胞癌内内毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、切片：病理蜡块连续切片，厚度4μm；步骤2、拷片：将切片放摊片机上37℃烤片30min后放65℃烤箱1h；步骤3、脱蜡：将切片放入切片架，置入含二甲苯盒内，进行脱蜡，每缸10min，共3次；步骤4、水化：将切片用无水乙醇Ⅰ浸没5min、90％乙醇Ⅱ浸没3min、80％乙醇III浸没3min、蒸馏水浸没3min×2缸；步骤5、抗原修复：将配好的TRIS-EDTA加入装有切片的缸内，待高压锅加水煮沸后放入，待温度上升到120℃后持续3min；步骤6、自然条件降温10min后，打开高压锅，将切片过2缸蒸馏水，每缸3min，用免疫组化笔对组织外缘画圈；步骤7、阻断内源性过氧化物酶：切片上滴加3％过氧化氢阻断，平放于装少量蒸馏水的湿盒上避光37℃烤箱孵育8min，过2缸蒸馏水，每缸3min；步骤8、孵一抗：用一抗稀释液配置一抗，根据组织大小将配好比例的一抗滴加50-100μL于组织上，平放于装少量蒸馏水的湿盒上37℃孵育35min；步骤9、洗涤一抗：PBST洗涤5min×3次；步骤10、孵二抗：滴加50-100μL鼠兔同用二抗于组织上，37℃烤箱孵育10min；步骤11、洗涤二抗：PBST洗涤5min×3次；步骤12、显色：按照DAB显色说明书配置显色液，按需滴于组织上并镜下观察，根据染色深浅调整染色时间，将切片放蒸馏水中终止显色1min，自来水冲洗2min；步骤13、复染及返蓝：切片放入含Mayer苏木素染色液缸内，缓慢摇晃切片并染色30s，自来水冲洗10min；步骤14、脱水：将切片用100％乙醇浸泡10min×2缸，二甲苯浸泡30min×2缸，此步骤为使玻片背景透明；步骤15、使用中性树胶封片；步骤16、显微镜镜检，图像采集，使用ImageJ定量分析免疫组化结果。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 蚌埠医学院第一附属医院 宜昌市中心人民医院(三峡大学第一临床医学院、三峡大学附属中心人民医院) 免疫组化检测肝细胞癌内内毒素的方法