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摘要:本发明涉及使用酶生产多核苷酸或寡核苷酸的新方法,其中所述方法适用于生产经修饰的多核苷酸或寡核苷酸,例如用于治疗的那些多核苷酸或寡核苷酸。
主权项:1.产生具有至少一个经修饰的核苷酸残基的单链多核苷酸产物的方法,所述方法包括:a在允许至少两个片段多核苷酸与模板多核苷酸退火的条件下,使包含与单链多核苷酸产物互补的序列的所述模板多核苷酸与所述至少两个片段多核苷酸的池接触,以生成其上具有退火的所述至少两个片段多核苷酸的模板多核苷酸,其中在所述至少两个退火的片段多核苷酸之间形成至少一个序列间隙;b使用核苷三磷酸的池和聚合酶延伸至少一个所述退火的片段多核苷酸,以填充所述至少一个序列间隙以生成至少一个延伸的片段多核苷酸;c使用连接酶连接片段多核苷酸和或延伸的片段多核苷酸以形成在双链体中与所述模板多核苷酸结合的所述单链多核苷酸产物;和d改变所述条件以使包含所述单链多核苷酸产物和所述模板多核苷酸的所述双链体变性,由此产生所述单链多核苷酸产物。
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