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摘要：本发明公开了基于变构HDA和CRISPRCas12b的单核苷酸突变原位成像方法，属于单核苷酸突变原位成像技术领域，首先，以BRAFV600E突变基因为检测靶标合成核酸，溶于缓冲液备用；在HAD引物的3端的3号位引入C碱基错配得到变构引物，借助热力学改变，实现对BRAFV600E突变型基因的特异性扩增；然后对CRISPRCas12b系统的sgRNA进行改造，其人工错配插入的位置为：单个碱基突变在18号位上；随后使用改造的CRISPRCas12b系统对扩增产物进行特异性识别突变型基因，并激活其反式剪切活性，快速剪切信号报告探针。通过上述方式，本发明借助人工插入错配改造的变构HDA和CRISPRCas12b系统实现对BRAFV600E突变基因的高特异性和灵敏度的检测，解决TC误诊漏诊和过度医疗的问题。
主权项：1.基于变构HDA和CRISPRCas12b的单核苷酸突变原位成像方法，其特征在于，首先，以BRAFV600E突变基因为检测靶标合成核酸，溶于缓冲液备用；在HAD引物的3端的3号位引入C碱基错配得到变构引物，借助热力学改变，实现对BRAFV600E突变型基因的特异性扩增；然后对CRISPRCas12b系统的sgRNA进行改造，其人工错配插入的位置为：单个碱基突变在18号位上；随后使用改造的CRISPRCas12b系统对扩增产物进行特异性识别突变型基因，并激活其反式剪切活性，快速剪切信号报告探针。
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百度查询： 重庆医科大学 基于变构HDA和CRISPR/Cas12b的单核苷酸突变原位成像方法
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