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摘要：本发明涉及一种NK细胞冻存液及其制备方法和应用。本发明以N‑三羟甲基甲基甘氨酸和甘氨酸钠为渗透性冷冻保护剂，以羧甲基壳聚糖、聚谷氨酸和聚谷氨酸钠为非渗透性冷冻保护剂，使其两者与培养基进行共混后所形成的冻存液在应用于NK细胞的冻存时，一方面渗透性冷冻保护剂可以渗透进细胞内，平衡好电解质浓度并结合水分子，以此保护细胞免受溶质、机械损伤，另一方面非渗透性冷冻保护剂也能高效地与体系中的水进行结合，减少冰晶生成，同时，还诱导胞内脱水、形成保护区，使得在胞内外均能降低机械损伤，在不加入DMSO和胎牛血清的基础下通过两者的协同作用共同赋予了冻存液对NK细胞拥有优异的冻存能力，NK细胞经复苏后的存活率高。
主权项：1.一种NK细胞冻存液，其特征在于：所述NK细胞冻存液包括培养基和添加在所述培养基的N-三羟甲基甲基甘氨酸、甘氨酸钠、羧甲基壳聚糖、聚谷氨酸和聚谷氨酸钠；所述N-三羟甲基甲基甘氨酸在所述培养基的浓度为1-2gL；所述甘氨酸钠在所述培养基的浓度为20-30mgL；所述羧甲基壳聚糖在所述培养基的浓度为100-150mgL；所述聚谷氨酸在所述培养基的浓度为250-300mgL；所述聚谷氨酸的分子量为50000-80000；所述聚谷氨酸钠在所述培养基的浓度为10-15mgL；所述聚谷氨酸钠的分子量为50-100kDa；所述培养基为RPMI-1640培养基。
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