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申请/专利权人：沈阳农业大学

摘要：本发明属于分子生物学领域，具体涉及用于马个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其19‑plex快速分型检测方法。本发明使用国际通用微卫星标记结合多重PCR技术,研发了一套马个体识别和亲子鉴定快速检测方法。包括：确定马的18个微卫星位点和1个性别鉴定位点并将所述18对微卫星引物和1对性别鉴定位点引物合成19对荧光标记引物、PCR扩增得到18条目标微卫星序列和1个性别鉴定位点序列及检测结果分析步骤。本发明可实现一次PCR反应即获得18个马微卫星标记的分型结果，同时鉴定性别，扩增结果稳定且具有良好的灵敏度，可用于马的个体识别、亲子鉴定以及基于微卫星标记的群体遗传学研究。

主权项：1.一种用于马个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组，其特征在于，由18对微卫星引物序列和1对性别鉴定引物序列构成，引物序列及其所携带的荧光标记为：微卫星位点AHT4，引物序列F:AACCGCCTGAGCAAGGAAGT，R:GCTCCCAGAGAGTTTACCCT；产物范围144-164bp，引物终浓度80nML，携带标记为FAM；微卫星位点HMS1，引物序列F:GGATACACATTTCACTTTAGCCG，R:CATTTATCATCATCTGATATGCTCTG；产物范围188-204bp，引物终浓度145nML，携带标记为FAM；微卫星位点CA425，引物序列F:AGCTGCCTCGTTAATTCA，R:CTCATGTCCGCTTGTCTC；产物范围226-246bp，引物终浓度165nML，携带标记为FAM；微卫星位点HTG10，引物序列F:ATTGGGCTTTTTATTCTGATCTGTC，R:CCCTCTGTCTATTTCTCATTTCTGG；产物范围282-306bp，引物终浓度120nML，携带标记为FAM；微卫星位点ASB23，引物序列F:GCCTTTATCTCCCCTTTTCAAC，R:GAAAGTCTTGGTTTTGGCATTG；产物范围344-380bp，引物终浓度133nML，携带标记为FAM；微卫星位点HMS3，引物序列F:TCAGATAGTGATAATGCCGTGG，R:GCTCTAAAGCCCCAACTCTTTG；产物范围438-460bp，引物终浓度120nML，携带标记为FAM；微卫星位点HMS6，引物序列F:AGGTGAGACGCACTTCTGTTATCAG，R:GTCATTCCCTGCATTTCATCACTAA；产物范围483-495bp，引物终浓度145nML，携带标记为FAM；微卫星位点HTG4，引物序列F:CTATCTCAGTCTTGATTGCAGGAC，R:GCTCCCTCCCTCCCTCTGTTCTC；产物范围126-138bp，引物终浓度67nML，携带标记为HEX；微卫星位点HMS7，引物序列F:TGTTGTTGAAACATACCTTGACTGT，R:ACAACCAGGAAACTCATGTTGATAC；产物范围170-190bp，引物终浓度145nML，携带标记为HEX；微卫星位点ASB2，引物序列F:CACTAAGTGTCGTTTCAGAAGG，R:GCACAACTGAGTTCTCTGATAGG；产物范围220-254bp，引物终浓度187nML，携带标记为HEX；微卫星位点HMS2，引物序列F:ACGGTGGCAACTGCCAAGGAAG，R:GATCTCTAGCTCAGTAAATCACAGG；产物范围305-325bp，引物终浓度100nML，携带标记为HEX；微卫星位点VHL20，引物序列F:GTCAATCCAGAGGTGATTCACATC，R:TGTGGTCAATGGTGCTGTCAAG；产物范围387-405bp，引物终浓度133nML，携带标记为HEX。微卫星位点LEX33，引物序列F:TGCCCAAGGTCACATAACTAATAAG，R:GTGTGAGCACTTTGCACCG；产物范围448-460bp，引物终浓度83nML，携带标记为HEX；微卫星位点LEX3，引物序列F:ACATCTAACCAGTGCTGAGACT，R:GAAGGAAAAAAAGGAGGAAGAC；产物范围142-164bp，引物终浓度120nML，携带标记为ROX；微卫星位点AHT5，引物序列F:CAACCAGCCACGGACACATC，R:GTACTCTGACTTCCCCCTCTAAGC；产物范围187-205bp，引物终浓度107nML，携带标记为ROX；微卫星位点ASB17，引物序列F:GCAGATGGTGCCTCTCCAATAG，R:GAGGGGAATGAGATCCACAAC；产物范围235-277bp，引物终浓度53nML，携带标记为ROX；微卫星位点HTG7，引物序列F:TAACCATTTTGTTACACCAACTCCC，R:AGTCACACTCCAATTTGCCCTG；产物范围411-421bp，引物终浓度80nML，携带标记为ROX；微卫星位点HTG6，引物序列F:GAGCAGACATTTGCCTGGTTAC，R:ACGGTCTTCACGTTCAGAATCTC；产物范围449-471bp，引物终浓度67nML，携带标记为ROX；性别鉴定位点AMEL，引物序列F:TCCTCCCGCTTGGTCTTGTC，R:TGTCCCAGCAGAATCCCTCA；产物范围361-366bp，引物终浓度67nML，携带标记为ROX。

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百度查询： 沈阳农业大学 用于马个体识别和亲子鉴定的微卫星标记引物组及其19-plex快速分型检测方法