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一种基于RNA靶向结合位点的LncRNA XIST基因敲入动物模型构建方法 

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申请/专利权人:桂林医学院附属医院

摘要:本发明公开了一种基于RNA靶向结合位点的LncRNAXIST基因敲入动物模型构建方法,包括生物信息学分析XIST基因与mmu‑miR‑140‑5p靶向结合位点在XIST基因上第七个外显子、体外实验证实XIST基因与mmu‑miR‑140‑5p在生物信息学分析中的靶向结合位点、靶向小鼠XIST基因包含有靶向结合位点的第七个外显子的sgRNA载体构建、sgRNA的体外转录、F0代小鼠获取及鉴定、F1代杂合小鼠获取及鉴定、纯合后代的获取过程XIST基因敲入动物模型,解决了CRISPRCas9对于全长达到17.9kb,且含有七个外显子的XIST基因敲入过程中由于片段过长造成的基因脱靶率高的问题。

主权项:1.一种基于RNA靶向结合位点的LncRNAXIST基因敲入动物模型构建方法,其特征在于:包括如下步骤:1使用starbase数据库进行生物信息学分析确认LncRNAXIST与microRNAmmu-miR-140-5p靶向结合位点信息;2通过NCBI数据库比对上述靶向结合位点在LncRNAXIST基因的位置;3通过NCBI数据库比对上述靶向结合位点在LncRNAXIST基因的第七个外显子;4通过双荧光素酶基因报告系统在体外实验中证实上述数据库显示的LncRNAXIST与microRNAmmu-miR-140-5p靶向结合位点真实存在;5LncRNAXIST全长17.9kb,根据其第七个外显子设计基于LncRNAXIST与microRNAsmmu-miR-140-5p靶向结合位点的LncRNAXIST基因敲入策略;所述的第七个外显子长度为7.6kb;6通过敲入LncRNAXIST第七个外显子,实现LncRNAXIST基因的敲入。

全文数据:

权利要求:

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