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申请/专利权人：上海南方模式生物科技股份有限公司;上海砥石生物科技有限公司;广东南模生物科技有限公司

摘要：本申请提供一种TNFRSF1B基因人源化动物模型的构建方法及应用。本申请构建的人源化TNFRSF1B基因改造动物模型能够加速与人TNFRSF1B基因或蛋白相关的领域的研究进展，例如利用人源化TNFRSF1B基因改造动物模型代替人试药，为进行TNFRSF1B靶点药物的临床前实验提供有效的模型和有力的工具。

主权项：1.一种TNFRSF1B基因人源化动物细胞的构建方法，其特征在于，包括：在非人动物细胞内导入人TNFRSF1B基因，使所述人TNFRSF1B基因在非人动物细胞中表达产生人源化的TNFRSF1B蛋白，同时降低或消除所述非人动物细胞内的内源TNFRSF1B基因的表达；利用基因编辑技术对非人动物细胞内的内源TNFRSF1B基因进行改造，得到人源化TNFRSF1B基因；所述非人动物为小鼠；所述细胞为受精卵细胞；所述构建方法采用CRISPRCas9基因编辑技术实现；所述构建方法具体包括：提供包括人TNFRSF1B基因同源重组载体、sgRNA以及Cas9的混合物，所述Cas9包括Cas9mRNA和或Cas9蛋白，将所述混合物注射到所述非人动物细胞中，将所述非人动物细胞转移至培养液中进行培养；所述人TNFRSF1B基因同源重组载体包括从5’端到3’端依次排列的5’同源臂、人TNFRSF1B基因、小鼠Tnfrsf1b基因、polyA以及3’同源臂；所述人TNFRSF1B基因的序列由人TNFRSF1B基因内含子1的部分序列与人TNFRSF1B基因的部分编码区序列组成；所述人TNFRSF1B基因内含子1的部分序列如SEQIDNO：1所示，所述人TNFRSF1B基因的部分编码区序列如SEQIDNO：2所示；所述小鼠Tnfrsf1b基因的序列如SEQIDNO：3所示；所述小鼠Tnfrsf1b基因与所述polyA之间还设置有WPRE调控元件，所述WPRE调控元件的序列如SEQIDNO：4所示；所述polyA的序列如SEQIDNO：5所示；所述5’同源臂的DNA序列如SEQIDNO：11所示；所述3’同源臂的DNA序列如SEQIDNO：12所示；所述sgRNA的靶位点序列如SEQIDNO：29所示。

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