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申请/专利权人：中国科学院苏州生物医学工程技术研究所

摘要：本发明公开了一种提供一种基于细菌裂解、等温扩增和CRISPR检测的一步法、可视化细菌检测方法及系统，本发明将细菌裂解、核酸等温扩增、CRISPR‑Cas12a检测、试纸条信号输出相结合，建立了便捷的检测平台。在本发明的方法中，将细菌的裂解、特异性基因的恒温扩增和特异性基因的CRISPR‑Cas12a检测整合至同一反应体系内、同一温度下进行，并且通过免疫层析试纸条进行信号输出。本发明所开发的CRISPR‑免疫层析试纸条检测平台具有特异性强、灵敏度高、效率高、便携性好等优点，在居家检测应用中具有很大的潜力。

主权项：1.一种基于细菌裂解、等温扩增和CRISPR检测的一步法、可视化细菌检测方法，该方法用于耐甲氧西林金葡菌的检测，其特征在于，该方法包括以下步骤：S1、提供免疫层析试纸条，其包括沿液体流动方向依次设置的样品垫、检测线和质控线，所述检测线上修饰有第一特异性捕获体并添加有链霉亲和素-胶体金标记物AuNP-SA，所述质控线上修饰有第二特异性捕获体；S2、提供检测反应体系，该检测反应体系包括裂解酶、等温扩增子体系和CRISPR-Cas12a检测子体系；其中，CRISPR-Cas12a检测子体系中的ssDNA的两端分别修饰有能被第一特异性捕获体捕获的第一标志物和能被第二特异性捕获体捕获的第二标志物，所述第二标志物能够与AuNP-SA结合；S3、将待测样品加入检测反应体系中进行等温扩增，反应结束后将产物溶液滴加到免疫层析试纸条的样品垫上，根据检测线和质控线的颜色判断待测样品中是否存在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌：当存在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌时，由crRNA引导的Cas12a酶能够特异性识别并切割带PAM的dsDNA靶标，并且激活针对ssDNA的反式切割活性，对ssDNA进行非特异性切割，形成只修饰有第一标志物的第一子ssDNA和只修饰有第二标志物的第二子ssDNA，产物溶液滴加到样品垫上后，AuNP-SA与第二子ssDNA结合，形成的结合物被质控线上的第二特异性捕获体捕获，从而使质控线呈红色，而检测线不显色；当不存在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌时，ssDNA未被切割使得其上同时保留有修饰的第一标志物和第二标志物，产物溶液滴加到样品垫上后，ssDNA与AuNP-SA结合，形成的结合物随后被检测线上的第一特异性捕获体捕获而使检测线呈红色，检测线上剩余的AuNP-SA继续向前流动，随后被质控线上的第二特异性捕获体捕获而使质控线呈红色。

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百度查询： 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 基于细菌裂解、等温扩增和CRISPR检测的一步法、可视化细菌检测方法及系统