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申请/专利权人：柯吴坚

摘要：本发明公开了一种基于TP0136基因异质性用于区分梅毒螺旋体不同亚型的分子分型方法，涉及一种对梅毒螺旋体不同菌株的分子分型方法，所述方法利用梅毒螺旋体属TP0136蛋白异质性建立。本发明方法通过检测梅毒螺旋体不同菌株TP0136基因异质性，用于区分梅毒螺旋体不同亚型，弥补了梅毒分子分型检测方法的不足；具有检测结果确切、灵敏度高的特点，易于推广。

主权项：1.一种基于非诊断或治疗目的的TP0136基因异质性用于区分梅毒螺旋体不同亚型的分子分型方法，其特征在于，所述方法利用梅毒螺旋体属TP0136蛋白异质性建立，具体步骤为：步骤1梅毒螺旋体属菌株传代和菌株DNA提取；步骤2梅毒螺旋体属TP0136序列分析和引物设计；步骤3梅毒螺旋体属TP0136DNA扩增、测序和分型；所述的梅毒螺旋体属包括9株梅毒苍白密螺旋体和广东省内临床梅毒患者分离的23株梅毒苍白密螺旋体临床分离株；所述9株梅毒苍白密螺旋体包括NicholsHouston株、NicholsSeattle株、NicholsDallas株、DAl-1株、Bal73-1株、Seattle81-4株、Chicago株、MexicoA株、SS14株；步骤1中所述的梅毒螺旋体属菌株传代是在新西兰白兔睾丸内进行的；步骤1中所述的梅毒螺旋体属菌株DNA提取中采用的1×细胞裂解缓冲液中包含10mMTris，0.1MEDTA，0.5％SDS；步骤3中所述的梅毒螺旋体属TP0136DNA扩增时采用的引物序列如SEQIDNO:1-5所示；步骤3中所述的梅毒螺旋体属TP0136DNA扩增时采用的PCR扩增反应试剂为每50μLPCR扩增反应试剂含5μL待检测DNA样本、200μMdNTPs、5μL10×GoTaqPCR缓冲液、1.5mMMgCl2、0.6μMTP0136引物、0.5U热启动TaqPCR聚合酶；步骤3中所述的梅毒螺旋体属TP0136DNA扩增时的条件控制为95℃变性10min；95℃1min、60℃2min、72℃1min，共45个循环；最后72℃延伸10min；步骤3中所述的梅毒螺旋体属TP0136DNA测序是将PCR扩增的产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定及纯化回收，双向DNA测序法进行测序。

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