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申请/专利权人：广东省农业科学院动物卫生研究所;广东永顺生物制药股份有限公司
摘要：本发明属于生物领域，具体涉及一种采用如SEQIDNO.1所示氨基酸序列的猪德尔塔冠状病毒重组N蛋白制备间接ELISA检测试剂盒的用途。通过选择该N蛋白用于间接ELISA检测方法检测母乳中猪德尔塔冠状病毒感染后诱导的IgA抗体，可以显著的提高灵敏度，经过实验验证，该蛋白同时具有优异的特异性。同时，本发明还提供了该基于该蛋白的间接ELISA检测试剂盒。
主权项：1.采用如SEQIDNO.1所示氨基酸序列的猪德尔塔冠状病毒重组N蛋白制备间接ELISA检测试剂盒的用途，所述间接ELISA检测试剂盒为用于检测母乳中猪德尔塔冠状病毒感染后诱导的IgA抗体的间接ELISA检测试剂盒；所述猪德尔塔冠状病毒重组N蛋白的制备方法为：将猪德尔塔冠状病毒HeN17毒株的N基因克隆到原核表达载体上，构建重组质粒；所述原核表达载体为pGEX-6p-1载体；将重组质粒转化到大肠杆菌BL21DE3中，得到重组表达菌株；重组N蛋白重组表达菌株经IPTG诱导，超声破碎，离心，取上清；所述上清中含有带有标签的PDCoV-N-GST重组蛋白；所述上清经纯化和3C蛋白酶酶切掉PDCoV-N-GST重组蛋白的标签蛋白，得到猪德尔塔冠状病毒重组N蛋白；所述IPTG诱导为加入IPTG至终浓度为1mM，在温度为16℃条件下诱导表达16h；PDCoV-N-GST重组蛋白的标签切除方法为：PDCoV-N-GST重组蛋白和GlutathioneSepharose4B按照2:1的体积比混匀，并分别将3C蛋白酶与PDCoV-N-GST重组蛋白按照1:100～1：200的重量比例混匀，置于4℃翻转摇床中分别作用8H～24H；然后将混合物加入层析柱中，收集流穿液即为切除GST标签的猪德尔塔冠状病毒重组N蛋白；3C蛋白酶与PDCoV-N-GST重组蛋白的重量比为1：200；翻转摇床内的反应时间为16h。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广东省农业科学院动物卫生研究所 广东永顺生物制药股份有限公司 一种猪德尔塔冠状病毒N蛋白的应用和试剂盒
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