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申请/专利权人：四川农业大学
摘要：本发明公开了一种薏苡遗传转化方法，其包括以下步骤：步骤1、将小白壳薏苡种仁的幼芽培养诱导出胚性愈伤组织；步骤2、将质粒通过热激法转化入EHA105农杆菌感受态细胞，涂布于YEP平板，培养；步骤3、将胚性愈伤组织挑于无菌组培瓶内，倒入准备好的农杆菌菌液，晃动瓶身使两者充分接触；侵染，使农杆菌侵染进入愈伤组织细胞；封存培养；步骤4、将共培养后的愈伤组织转置于MS筛选培养基中，筛选后，非抗性愈伤组织死亡，将抗性愈伤转移至MS分化培养基中，光照培养。本发明涉及一种将外源基因遗传转化进入薏苡体内的方法，该方法可成功将外源的绿色荧光蛋白基因转化进入薏苡体内。因此，该方法可用于薏苡生物育种。
主权项：1.一种薏苡遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、选择成熟健康的小白壳薏苡种仁，灭菌培养，切下幼芽，将幼芽培养诱导出胚性愈伤组织；步骤2、选择含有以玉米泛素启动子UBI驱动绿色荧光蛋白GFP表达的质粒pEXT06，以卡那霉素抗性基因NPTⅡ作为原核筛选标记，以潮霉素磷酸转移酶基因HPT作为真核筛选标记，将该质粒通过热激法转化入EHA105农杆菌感受态细胞，涂布于YEP平板，培养；步骤3、将颜色黄嫩、颗粒感明显的胚性愈伤组织挑于无菌组培瓶内，倒入准备好的农杆菌菌液，晃动瓶身使两者充分接触；侵染，使农杆菌侵染进入愈伤组织细胞；侵染结束后，倒掉液体，将愈伤组织置于装有无菌滤纸的培养皿中，于滤纸上吸干水分，多次更换滤纸至滤纸不再被浸湿，之后在超净台中晾干，封存培养；步骤4、将共培养后的愈伤组织转置于MS筛选培养基中，筛选后，非抗性愈伤组织死亡，将抗性愈伤转移至MS分化培养基中，光照培养，抗性愈伤组织再生出幼芽；培养，幼芽生根成活。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 四川农业大学 一种薏苡遗传转化方法
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